化學發光圖
❶ 關於光澤精化學發光法
常用的幾種SOD檢測方法:
1. 分光光度法
分光光度法是最為典型的檢測SOD的方法,這種方法使用了細胞色素 C(cytochrome C)或者氮藍四唑(NBT)(圖1)。用cytochrome C的還原法來檢測O2-是因為還原後的cytochrome C會生成紫色的染料(圖解 2)。這是自SOD被發現以來最常用的方法。
Cyt(FeⅢ) + O2- — Cyt(FeⅡ) + O2
因為cytochrome C很容易被NADPH還原酶或者其他的還原劑所還原,因此必須要考慮樣品的污染因素。而且,這種方法需要每隔1.5分鍾就要察看一下,因此不適合做大批量的實驗。NBT法的原理是生成不溶於水的藍色甲臢染料(lmax: 560 nm)去和O2-反應。這種染料不溶於水,在做長時程分析時會生成不均一的沉澱物,從而影響實驗數據的重現性。為了得到水溶性的甲臢染料,許多改良後的方法如添加BSA被人們所採用。但是,添加了不必要的蛋白質會使數據分析變得十分復雜,而且NBT會被多種還原劑所還原。NBT的這種特性被用於酮胺的檢測,酮胺可以作為糖尿病的標記物並且是Maillard反應的中間體。NBT法的最大缺點是即使加入過量的SOD也不能獲得100%的抑制率,原因是NBT會與黃嘌呤氧化酶直接反應。
2. 化學發光法
用於O2-檢測的化學發光探針同樣也能用於SOD的檢測,這種探針分為2種,一種是光澤精,另一種是熒光素衍生物(MCLA)。這種化學發光反應對pH有高度的依賴性。例如,光澤精只有在pH 9.0或者更高處會發出強烈的化學光。因此,在生理的pH條件下用這種方法檢測SOD是不可行的。另一方面,MCLA在生理條件下能夠發出較強的化學熒光,因此可以用於人腦的Cu,Zn-SOD活性的檢測。但是,MCLA不適合用作SOD檢測的探針,因為它不單單和O2-反應,還會和單質氧反應。而且MCLA與溶解氧反應後會發出化學光,轉移的金屬離子還會加速氧化反應。
3.電子自旋共振(ESR)光譜法
在室溫下,溶液中O2-的ESR信號不能直接被檢測出,但能夠通過自旋捕捉法間接獲得。最常見的誘捕劑是5,5-dimethyl-1-pyrroline N-oxide(DMPO)。由於O2- 誘捕DMPO會產生一個特殊的光譜圖,因此ESR法是O2-檢測的方法中特異性最好的一種。然而,DMPO與O2-間的二階速度常數比O2-自發反應常數相對要低,因此需要向溶液中加入大量的DMPO(如:終濃度為0.45M)。這樣,每次試驗所要用的DMPO將花去大筆的經費。
這種方法的另一個問題是在實驗中需要一套較為昂貴的ESR設備。
4.利用水溶性四唑鹽檢測SOD的新方法
為了克服上述的諸多問題,我們在做SOD檢測時需要考慮如下幾個方面:實驗設備要簡單、經濟,pH靈敏度要低,對O2-有高度的特異性。如果用分光光度計作為一種簡單的實驗設備的話,就需要一種與cytochrome C和NBT相似的比色探針。檢測中最重要的一點是在沒有其他物質干擾的情況下,測定出SOD100%的抑制率。為了得到一種新的檢測SOD的方法,我們對還原後能生成水溶性甲臢的四唑鹽作了一系列的實驗
❷ 化驗單上什麼叫做化學發光
化學發光是物質在進行化學反應過程中伴隨的一種光輻射現象,可以分為直接發光和間接發光。直接發光是最簡單的化學發光反應,有兩個關鍵步驟組成:即激發和輻射。
如A、B兩種物質發生化學反應生成C物質,反應釋放的能量被C物質的分子吸收並躍遷至激發態C*,處於激發的C*在回到基態的過程中產生光輻射。這里C*是發光體,此過程中由於C直接參與反應,故稱直接化學發光。
間接發光又稱能量轉移化學發光,它主要由三個步驟組成:首先反應物A和B反應生成激發態中間體C*(能量給予體);當C*分解時釋放出能量轉移給F(能量接受體),使F被激發而躍遷至激發態F*;最後,當F*躍遷回基態時,產生發光。
(2)化學發光圖擴展閱讀
依據供能反應的特點,可將化學發光分析法分為:
1)普通化學發光分析法(供能反應為一般化學反應);
2)生物化學發光分析法(供能反應為生物化學反應;簡稱BCL);
3)電致化學發光分析法(供能反應為電化學反應,簡稱ECL)等。
根據測定方法該法又可分為:
1)直接測定CL分析法;
2)偶合反應CL分析法(通過反應的偶合,測定體系中某一組份);
3)時間分辨CL分析法(即利用多組份對同一化學發光反應影響的時間差實現多組份測定);
4)固相、氣相、液相CL分析法;
5)酵聯免疫CL分析法等。
參考資料來源:網路-化學發光法
參考資料來源:網路-化學發光
❸ 化學發光成像系統需要配置什麼樣的CCD相機
化學發光是物質在發生化學反應時產生的一種光輻射現象,根據其版特性,在生物學領權域中常被用來進行蛋白質與DNA的檢測。化學發光成像系統相較具有高靈敏度、無材料損耗、自動曝光過程、電子圖片存檔等眾多優勢,但是,由於系統是依靠HRP或AP等特定的酶與底物結合來運作,因此所產生的光輻射比較微弱,相應的光信號的採集過程難度就大了不少。所以,想要獲取到如此微弱的化學發光,就需要配置性能較高的CCD相機。
❹ 電化學發光電壓和電化學發光圖上有兩個發光峰是什麼原因
是要做電化學測試吧。最簡單方法是查閱文獻,直接選擇文獻中的電壓窗口。 a)先把電壓窗口設大一點,掃個CV,看看峰都處在哪裡。進而逐步縮小電壓窗口,直至達到自己分析測試目的。 b)如果是要來個EIS,電壓一般不設置,即默認為開路OC。
❺ 在做Western blot進行化學發光檢測時出現各種狀況的結果圖像,怎樣分析這些圖像以便知道問題所在
這個沒法分析,你至少給個你的試驗步驟吧。。每一步做的不對都是問題。。
而且你的結果是什麼樣子?無信號?雜信號?
❻ Western Blot 化學發光(ECL)為什麼出現高背景
做Western Blot發光實驗經常有「背景太高」問題的出現,要弄清「背景太高」的原因,先要知道「背景」是什麼,「背景」也是發光,影響發光的因素就會影響背景。
影響發光的因素主要有:1.含HRP的抗體;2.發光試劑;3.和發光試劑反應的雜質,如含雜質的膜。這裡面,在很短時間內曝光造成的背景多是由於含HRP的抗體的因素造成的,抗體濃度過高,洗滌不充分,封閉不充分等都可以造成抗體在膜上的非特異結合,製造背景;轉移膜包括最後曝光時包裹的塑料薄膜,含有雜質也會製造背景,這種背景較容易發現鑒別。
值得注意的是,發光試劑不好,也會製造背景,這在較長時間曝光的情況下明顯,有人做過實驗,在較長曝光(30分鍾以上),優質的發光試劑背景明顯較一般的發光試劑背景低,得到的圖像也更漂亮,結果也更可靠。
對一些實驗來說,如果實驗結果本應是多條帶,只是一些帶由於蛋白量多較強,短時曝光即可檢測,而另一些帶由於蛋白量相對較少,需要長時間曝光才可檢測,這時候主要的影響因素就是發光試劑,因為如果加大抗體的量,普通的發光試劑背景也會相應加大,影響較弱條帶的檢測,如果減少抗體的量,普通的發光試劑較弱條帶不易檢測,長時間曝光同樣隱藏在背景之中。這時如果不知道還有較弱條帶的存在,實驗的結論實際上被發光試劑影響了。如果有能長時間曝光而低背景的發光試劑,那麼得到的結果就會非常可靠。
所以,較好的抗體和實驗過程,再採用優質的發光試劑,就可以減少背景,得到漂亮、真實、可靠的發光結果。
其餘自己看:
http://www.engreen.com.cn/procts/ECL2.htm
❼ 電化學發光作圖需要安靜的環境嗎
化學發光法:其是利用化學反應產生的能量進行激發發光,其具有儀器簡單、檢測限低、線性范圍寬等優點,在化學分析方面應用廣泛。與熒光法相比,化學發光法不需要外來的光源,從而減少了光散射,降低了噪音信號的干擾,提高了檢測的靈敏度,擴大了線性動態范圍。其缺點是選擇性差,會對一個系列的化合物做出反應,而不是針對單個的某一化合物。另一個缺點是化學發光的發射強度依賴於各種環境因素,在不同的環境體系中,發射強度和時間的曲線有較大的差別,所以必須嚴格控制外界的各種因素。
❽ 化學發光免疫分析儀中國有幾家在生產都是什麼情況求了解,謝謝!
現在國產的有:1.深圳新產業(半自動做得一半,最近因全自動上市而日漸興起)。2.北京源德(半自動設備在國內保有量很大,全自動在12年也上市了)。3.北京貝愛康(國內磁微粒發光法的典範,已經被源德收購)。4.北京科美東雅(半自動處在中游水平,全自動只是全自動加樣加上了半自動發光組合而成,不是真正意義上的全自動,目前市場很一般)5.新波(國內時間分辨發光的代表《做時間分辨的還有個廣州豐華,但市場表現比不上新波》,乙肝項目國內市場做的非常好,目前被PE收購)。6.鄭州安圖(安圖生物技術基礎一般,但是做市場的能力全國一流!設備水平一般,但是參數都做的很牛。目前市場總體做的不錯,全自動也即將上市)。7.威海威高(半自動做的很爛,最近上市了200速的全自動,設備很大很漂亮,但是試劑情況以及實際使用情況還不明了,市場總體表現目前一般)。8.北京泰格科信,老牌的發光廠家(其試劑批號很全,甚至有批號但是做不出來試劑!技術水平一般,市場混亂,日益走低)。9.四川邁克(新上市的全自動,但是試劑種類非常少!目前還沒有見過用戶)。10.另外還有一些如北京大成、河北的康普生(只生產設備)等一些小廠家!
市場總體如此,寫的比較簡單,詳細的可以私信我交流。
❾ 化學發光免疫分析儀中國有幾家在生產都是什麼情況
現在國產的有:
深圳新產業(半自動做得一半,最近因全自動上市而日漸興起)。
北京源德(半自動設備在國內保有量很大,全自動在12年也上市了)。
北京貝愛康(國內磁微粒發光法的典範,已經被源德收購)。
北京科美東雅(半自動處在中游水平,全自動只是全自動加樣加上了半自動發光組合而成,不是真正意義上的全自動,目前市場很一般)。
新波(國內時間分辨發光的代表《做時間分辨的還有個廣州豐華,但市場表現比不上新波》,乙肝項目國內市場做的非常好,目前被PE收購)。
鄭州安圖(安圖生物技術基礎一般,但是做市場的能力全國一流!設備水平一般,但是參數都做的很牛。目前市場總體做的不錯,全自動也即將上市)。
威海威高(半自動做的很爛,最近上市了200速的全自動,設備很大很漂亮,但是試劑情況以及實際使用情況還不明了,市場總體表現目前一般)。
北京泰格科信,老牌的發光廠家(其試劑批號很全,甚至有批號但是做不出來試劑!技術水平一般,市場混亂,日益走低)。
四川邁克(新上市的全自動,但是試劑種類非常少!目前還沒有見過用戶)。
另外還有一些如北京大成、河北的康普生(只生產設備)等一些小廠家。
❿ 有哪位大神解釋一下電化學發光法,跪謝
化學發光法是分子發光光譜分析法中的一類,它主要是依據化學檢測體系中待測物濃度與體系的化學發光強度在一定條件下呈線性定量關系的原理,利用儀器對體系化學發光強度的檢測,而確定待測物含量的一種痕量分析方法。
電化學發光分析法具有靈敏度高、儀器設備簡單、操作方便、易於實現自動化等特點,廣泛地應用於生物、醫學、葯學、臨床、環境、食品、免疫和核酸雜交分析和工業分析等領域。
在21世紀中必將繼續為解決人類面臨的各種重大問題發揮更加顯著的作用。
化學發光與其它發光分析的本質區別是體系產生發光 (光輻射) 所吸收的能量來源不同。
體系產生化學發光,必須具有一個產生可檢信號的光輻射反應和一個可一次提供導致發光現象足夠能量的單獨反應步驟的化學反應。
(10)化學發光圖擴展閱讀
依據供能反應的特點,可將化學發光分析法分為:
1)普通化學發光分析法(供能反應為一般化學反應)。
2)生物化學發光分析法(供能反應為生物化學反應;簡稱BCL)。
3)電致化學發光分析法(供能反應為電化學反應,簡稱ECL)等。
根據測定方法該法又可分為:
1)直接測定CL分析法。
2)偶合反應CL分析法(通過反應的偶合,測定體系中某一組份)。
3)時間分辨CL分析法(即利用多組份對同一化學發光反應影響的時間差實現多組份測定)。
4)固相、氣相、液相CL分析法。
5)酵聯免疫CL分析法等。