组织化学

Ⅰ 免疫组织化学sp法和pv法的区别

一·第二代聚合酶两步法（ PV，En Vision)
PV－9000是2001年投入美国市场的，它是将二抗抗体分子的单价Fab段与酶聚合在一起，与一抗结合后，直接用底物进行显色的方法。此方法由于简单、快速、敏感性强且避免了内源性生物素所造成的背景染色，以有逐渐取代其他免疫酶组织化学检测方法的趋势。
PV法操作流程
1石蜡切片脱蜡至PBS。
2 0.3％H2O2甲醇液或3％H2O2室温孵育20min。
3 抗原修复。
4滴加适当稀释的一抗370C 60min或40C过夜。
5 PBS洗涤。
6 酶标记二抗370C 30min或室温60min。
7 DAB(0.04%)显色（镜检控制），水洗、复染、封片

二·sp法是一抗＋生物素化二抗＋HRP标记的链霉卵白素（HRP标记的亲和素）
一般的sp法步骤啊,具体如下：
1.烤片，68℃，20分钟,
2. 常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水；二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min
3.阻断 灭活内源性过氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10min，PBS冲洗3X5min；
4. 抗原修复:置0.01M枸橼酸缓冲液（PH 6.0）中用煮沸（95℃，15－20min），自然冷却20min 以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温，PBS冲洗3X5min。
5. 正常羊血清工作液封闭，37℃10 min，倾去勿洗.
6. 滴加一抗4℃ 冰箱孵育过夜，PBS冲洗3X5min（用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照）；
滴加生物素标记二抗, 37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;
7. 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;
8. DAB/ H2O2反应染色，自来水充分冲洗后，
苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。

三·检测试剂盒
灵敏度高而极易控制背景的检测系统试剂盒是最为理想也是免疫组化染色优劣的关键，根据免疫组化技术发展至今PV系列及SP试剂盒更优于其它试剂盒。检测系统应与一抗来源相匹配，否则检不出目的物。如一抗是鼠单或多抗的，二抗就应该是羊或兔抗鼠的。

四·建议选SP，亦可根据实验室习惯及在组织中的表达情况来定

Ⅱ 组织化学的含义是什么

组织化学histochemistry
为在组织水平，对组织内存在的各种物质进行定性、定量以及其局部的和移动的部位分析的方法。与细胞化学同样，可利用于特异的显色反应，显微分光法，荧光抗体法，放射自显影法等。
The
branch
of
science
that
deals
with
the
chemical
composition
of
the
cells
and
tissues
of
the
body.
组织化学：研究身体细胞和组织的化学构成的一门科学

Ⅲ 免疫组织化学染色诊断是什么意思

指在抗体上结合萤光或可呈色的化学物质，利用免疫学原理中抗原和抗体间专一性的结合反应，检测细胞或组织中是否有目标抗原的存在，此方式不只可以用来测知抗原的表现量也可观察抗原所表现的位置。只要是能够让抗体结合的物质，也就是具有抗原性的物质包括蛋白质、核酸、多糖、病原体等都可侦测。

免疫组织化学的优势在于专一性、灵敏度、简便快速以及成本低廉，所以广为医院采用，通常是借由特定的肿瘤标记来筛选癌症。免疫组织化学染色法对基础研究及预防和诊疗上都是相当重要的一个方法。

(3)组织化学扩展阅读

应用的基本原则简述如下：

1、确定细胞类型和形态。组织细胞内有些蛋白具有组织特异性，如胶质原纤维酸性蛋白只存在于星形胶质细胞内，神经丝蛋白只存在于神经细胞内。通常把这些具有组织特异性的蛋白称为标记性蛋白。通过标记性蛋白的特异性抗体可确定细胞种类。

有些细胞在光镜下不易辨认，通过对胞质内的特定蛋白实施免疫组化染色，便能清楚显示此类细胞外形轮廓。这种作用在神经科学研究和肿瘤临床病理中显得尤为重要。

2、辨认细胞产物的来源。利用某些细胞产物为抗原，制备相应的抗体，对组织细胞实施免疫组织化学染色，以确定细胞产物的来源。如内分泌细胞产生的各种激素，大多数可用免疫组化染色技术辨认，据此可研究细胞的分泌功能及对内分泌肿瘤作功能分类，检测分泌异位激素的肿瘤等，了解细胞分化程度。

3、确定细胞的分化程度。不同的同一类细胞多表达不同的标志性蛋白，根据对这些不同蛋白的鉴定可确定细胞的分化程度。例如，神经上皮细胞的标志性蛋白是巢蛋白，当其分化为放射状胶质细胞时表达波形蛋白。

在神经元发生期分化为成神经细胞时则表达Ⅲβ神经微管蛋白，成神经细胞分化为成熟的神经元时表达神经丝蛋白。

4、追踪神经纤维束和它的投射区。用于此目的的免疫组织化学方法常与轴浆运输示踪法相结合来研究神经元之间的联系，轴浆运输示踪法是利用某些物质可被神经末梢摄取，经轴质逆行运输到胞体的特点，用组织化学方法显示出神经元的轮廓。常用示踪剂有辣根过氧化物酶和荧光金等。

5．在临床病理中的应用。如鉴定病变性质，发现微小病灶，探讨肿瘤起源或分化表型，确定肿瘤分期，指导治疗和预后。辅助疾病诊断和分类，寻找感染病因等。

Ⅳ 什么是“组织化学”

组织化学是指以常用的组织化学技术,对细胞内主要化学成分和活性的粗略(一般性)的研究.
概要介绍如下:
一,______ 核酸(DNA和RNA)

(一)__ 化学特性
1.分布: DNA (细胞核内)
RNA(核仁10% ;细胞质-核糖体90%)
2. 分子结构:戊糖 + 磷酸 + 碱基
特点:① 大量的磷酸基团→酸性
(嗜碱性的基础)
② 戊糖—被盐酸水解→醛基
(成为Feulgen法显示核酸的基础)
② 戊糖—被盐酸水解→醛基 (成为Feulgen法显示核酸的基础)

③ 可以完全水解或部分水解
④ 可以用RNAase或DNAase消化
[ 对照实验(—)]
_
(一)__ 显示方法
1. 福尔根(Feulgen)反应显示DNA
[ 原理 ] 在60℃温度下,将DNA用1N盐酸水解,DNA双链打开成单链,先释出碱基,然后脱氧核糖释出醛基,该醛基与Schiff氏液形成紫红色沉淀.
[ Schiff试剂显色原理 ]
碱性品红 亚硫酸 → 白亚黄酸
(无色试剂,称为Schiff试剂)
[方法]
固定剂的选择可用一般的组织学固定液,常
用Carnoy固定液.
Carnoy固定液:
纯酒: 氯仿: 冰醋酸 = 6:3:1
(60ml) (30ml) (10ml)
恒冷箱切片机的具体染色步骤如下:
⑴ 切片固定在冰醋酸与纯乙醇(1:3 V/V)
中10分钟.
⑵ 由乙醇降至蒸馏水中.
⑶ 用1N盐酸浸泡.
⑷ 放入预热到60℃的1N盐酸中,留6分钟.
⑸ 放入室温的1N盐酸中.
⑹ 放入Schiff液试剂,保持在暗处,60分钟
⑺ 用新配制的SO2水浸洗3次(脱掉未反应
的Schiff液).
⑻ 蒸馏水浸洗净(必须用蒸馏水→洗净无色品红,
否则,残留试剂→有色品红).
⑼ 脱水透明,封固.
结果:核内DNA染为红紫色.
对照:仅改变第4步为1N盐酸,室温15分钟→(-).
[ 注意事项 ]
⑴ 不用醛类固定剂如Bouin,戊二醛,丙烯醛等.
常用Carnoy液,甲醇等.
⑵ 控制水解时间,不同的固定剂用不同的时间,
如:Carnoy 8分钟;Genker 5分钟;
Susa 18分钟 ★ 最适条件应自行试验.
⑶ 控制温度,一般1N盐酸60℃;
如果5N盐酸18～25度.
⑷ 保证Schiff试剂的纯净度.
⑸ SO2要新配制,除去多余的 Schiff液宜用之.
⑹ 必须对照.

2._ 显示核酸的其它方法
⑴ Kurnick甲绿Methylgreen显示DNA法
⑵ 甲绿派若宁Methy green-Pyronin显示DNA和
RNA法
⑶ 菊花青铬明矾(GC)显示核酸法
⑷ 丫啶橙Acridine Orange显示DNA和RNA法
⑸ 核酸提取法
_一,______ 蛋白质(Protein)
_
(一)蛋白质的分子结构
蛋白质的基本单位是氨基酸,肽键将不同的氨基酸结合在一起,除氨基和羧基之外,还含有其它基团,如:—羟基,硫氢基,二硫基等.依其结构特点可分为:酸性氨基酸 和碱性氨基酸 ;芳香族氨基酸:苯丙氨基酸,酪氨基酸;杂环类氨基酸:组氨基酸,色氨基酸,亚氨基酸,脯氨基酸,羟脯氨基酸.
_
(二)目前应用

1._ 用于蛋白质的一般定性
① 确定是否为蛋白质
② 确定蛋白质的酸碱性
③ 显示蛋白质的特殊基团
2._ 用于蛋白质功能定性和定位
_(三)染色方法
目前,研究蛋白质功能定性和定位时多用酶
组织化学法,配体—受体结合法,免疫组化法以
显示特殊的蛋白质.这里仅介绍一般的染色方法.
1.四氮化联邻茴香胺法
(Tetra-azotized-o-anisidine)
[ 应用 ] 广泛应用于显示酶的活性
[ 原理 ] 芳香伯胺与亚硝酸作用,在低温下(<
5℃)可生成重氮盐,此即重氮反应.重氮盐可
与酚类作用生成有色化合物——偶氮化合物.上
述反应必须在酸性条件下进行.
本实验,联邻茴香胺在酸性,低温条件
下与亚硝酸作用生成四氮盐.四氮盐有两个
重氮盐,其中一个重氮基在碱性条件下与所
要显示的组氨酸,色氨酸及酪氨酸的苯环结
合产生偶联反应,另一个重氮基与酚类或奈
类发生偶联反应以增色.因此,可以用生成
的偶氮染料来代表组织细胞的蛋白质含量.
[ 方法 ]
1._ 四氮盐配制
⑴ 天平称取联邻茴香胺0.25g(有毒,通
风橱内进行).
⑵ 在冰浴下,加入已预冷8%盐酸10ml,
玻璃搅拌,促其溶解,混合后为悬浊液.
⑶ 称NaNO2 0.15g溶于1ml蒸馏水中(冰浴
下).
⑷在冰浴下,将配好的NaNO2溶液分三次倒入邻联茴香胺悬浊液内,每次倒入都须玻棒搅动,因产生NO2可有黄烟冒出,至黄烟停止再倒下一次液体.放入冰箱(4℃)内,约20分钟,待溶液变为黄色.
⑸倾出上清液,勿将沉渣泛起,弃去沉渣.
⑹用NaHCO3细粉(约0.5～0.6g)逐渐加
入上清液内,边加边搅拌(冰浴下).
⑺以刚果红试纸测中和点,待试纸不变蓝即达到中和.收集于标本瓶(或广口瓶)内,置冰箱备用.此液不稳定,置冰箱内可保存两周,若变为橘红色则失效.
_
2._ 偶氮反应
—Carnoy固定的大鼠肝,肠等石蜡切片.
⑴ 切片脱蜡至水.
⑵ 将切片放入下列溶液中(在冰浴中至2～3℃),
浸染10分钟.
用前配制:
四氮化联邻茴香胺溶液 4ml
0.1巴比妥缓冲液 (pH9.2) 20ml
24ml
⑶ 入1N盐酸(冰浴中2～3℃)浸洗10秒,多余盐
酸以滤纸吸干.
⑷ 入H酸饱和液,浸染30分钟(冰浴或冰
箱内).
H酸饱和液配制:H酸 0.4g
0.1M巴比妥缓冲液 20ml
(pH9.2) 过滤后使用!
⑸ 蒸馏水冲洗,脱水,透明,封固(树胶)
[ 结果 ]
酪氨酸,组氨酸,色氨酸染成红棕色(+)
※ 0.1M巴比妥钠50ml配制
① 分析天平称巴比妥钠(MW=206.18)
1.0309g
② 于量瓶内+蒸馏水50ml至刻度即可.
0.1M巴比妥缓冲液,pH9.2(20ml)配
制: 0.1M巴比妥钠 19.1ml
0.1N盐酸 0.9 ml
20 ml
2.其它的显示蛋白质的方法
⑴ 米朗反应(Millon Reastion)→显示酪氨
酸的方法
酪氨酸→羟苯基 亚硝酸 →亚硝基苯+Hg→有色物
注:胶原蛋白不显色,其它蛋白质都显色(+)
⑵二硝基氟苯Dinitro—fluoro—benzene (DNFB)法
DNFB与—NH2,SH和酪氨酸产生弱有色反应,
可被偶氮染料加强.
⑶ 酪氨酸重氮化偶联反应
⑷ 蛋白质硫氢基DDD法(固定时避免
氧化剂)
⑸ 铁—铁氰化钾反应显示SH基
⑹ 高甲酸阿尔辛蓝显示SS基法
⑺ 免疫荧光法显示蛋白质
三,碳水化合物
中性多糖——糖原
碳水化合物 酸性多糖——硫酸软骨素 A,B,
C,肝素,硫酸角
(组织中—多糖类) 质素,透明质酸等
蛋白多糖——粘蛋白,唾酸粘蛋白
糖 脂——脑苷脂类
※ 组织中糖的种类较多,因此,要特异性地显示各种
糖类必须用抑制和酶水解来对照实验.
本章仅以高碘酸雪夫法(PAS法)说明之,其它的
方法还有Alcian blue法,甲苯胺蓝异染性染色法等.

高碘酸雪夫法 Periodic—Schiff(PAS)method
[ 原理 ] 高碘酸为强氧化剂,它可以氧化多糖
分子内1,2—乙二醇(顺式和反式)而
产生醛基,此醛基再与Schiff试剂结合即
产生红 紫色.
[ 方法 ] 改良的McManus(1946),高碘酸雪夫法
标本:
① Carnoy固定的大白鼠肝,肾,肠石蜡切片
② 大白鼠肝横冷箱切片(未固定)
[ 步骤 ]
(1) 切片脱蜡入水(横冷箱切片免)
(2) 入0.5%高碘酸水溶液,室温,2～5分钟
(3) 蒸馏水涮洗
(4) 入Schiff试剂,洗3次,每次2分钟
(5) 入SO2水中,洗3次,每次2分钟
(6) 自来水洗5～10分钟
(7) 蒸馏水稍洗
(8)入Mayer氏苏木精副复染核1分钟
(9) 自来水5分钟,换蒸馏水
(10)脱水,透明,封固
[ 结果 ]
PAS(+)→红紫色或红色;核→蓝色
Carnoy固定,糖原原位定位不佳,有
移位现象.
[ 对照 ]
① 用唾液酸淀粉于37℃消化20～30分钟.
② 苯甲酰或乙酰化法作对照(抑制法)
[ 注意事项 ]
①必须按照规定配方配制试剂,按规定的时间 反应.以避免非特异反应.例如:入高碘酸水溶液时间不宜过长,否则非特异着色.
②多糖大多都易溶于水,固定时应避免扩散或移位.
冰冻切片+苦味酸福尔马林→固定→避免扩散或移位.
③注意溶液的pH值:高碘酸液的pH不应超过5.
④注意温度.反应宜在<25℃的室温下进行,否则可氧化醛基为羧酸.
⑤高碘酸溶液的浓度宜控制在0.5%～1%(0.02—0.1M)浓度过高则会发生非特
异反应.
⑥为充分显示多糖中的糖原,可在过碘酸
中加入5%醋酸或纯乙醇固定,但往往有
溶解和扩散.
⑦为阻止胶原纤维和网状纤维阳性反应,
可使用还原液,于使用Schiff液之前.
[ 分析结果 ] PAS反应阳性物质:糖原,中
性粘蛋白,中性唾液性粘蛋白.
四,脂类
[ 组织中的脂类 ]
单纯脂类 脂肪酸
醇的化合物(如:甘油三脂等)
复合脂类 磷脂(卵磷脂,脑磷脂)
脂类 鞘磷脂
糖脂(脑苷脂,神经苷脂)
衍生脂类 胆固醇
肾上腺素
性激素
[ 显示脂类的基本原理 ]
用易溶于脂类的染料,使之溶于所检
的脂质(如脂滴)中,使组织内的脂类着色.
[ 常用方法 ]
苏丹黑B法,油红O法,硫酸尼罗蓝法
[ 基本要求 ]
⑴ 不用石蜡切片.
⑵ 固定剂一般用Formalin保存磷脂较好.
⑶ 方法:
① 物理法:脂溶性染料,不溶于水,属偶
氮染料.常用苏丹Ⅲ,Ⅳ,苏
丹黑 ,油红O等.
② 化学方法:硫酸尼罗蓝显示脂肪酸.
③ 选择性提取法(对照)
实验举例:苏丹黑B法
[ 原理 ]
苏丹黑为偶氮染料,具有脂溶性,可
溶于无水酒精,但不溶于水(常用70%酒
精饱和液).当组织切片入染液时,苏丹
黑B便离开染液而溶于组织内的脂质(如脂
滴中)使组织内脂类着色.
标本:
兔肾上腺和睾丸横冷箱切片,10μm厚,不
固定(或用10%Formalin固定10分钟后水洗).
[ 方法 ]
① 入蒸馏水洗
② 于70%乙醇内涮洗
③ 入苏丹黑B 70%B饱和液,染5～10分钟
④ 于50%酒精内浸洗
⑤ 蒸馏水中洗
⑥ 入Mayer苏木精(复染细胞核)1分钟
⑦ 自来水冲洗5～10分钟
⑧ 入蒸馏水
⑨ 甘油明胶(或Apathy糖胶)封固
[ 结果 ] 细胞内脂滴均呈黑色

Ⅳ 免疫组织化学的全过程包括哪些步骤

免疫组织化学的全过程包括哪些步骤
免疫组织化学的全过程包括:1.抗原的提取与纯化;2.免疫动物或细胞融合,制备特异性抗体(免疫球蛋白)以及抗体的纯化;3.将显色剂与抗体结合形成标记抗体

Ⅵ 免疫组织化学病理诊断melan一a(十十十)什么意思

免疫组织化学病理诊断melan一a(十十十)什么意思
免疫组织化学(简称免疫组化)技术是利用抗原和抗体的特异性免疫反应来定位组织中某种抗原成分的一门技术,在一般病理检查不能明确诊断的疑难病例常要用到它,对原发病灶不明的癌症,诊断意义更大.但不能据此认为,免疫组化检查比病理检查更准确.
免疫组化在肿瘤病理诊断上主要用于以下几个方面.
(1)恶性淋巴瘤的诊断和鉴别诊断例如,滤泡型恶性淋巴瘤与淋巴结的反应性增生有时光凭显微镜很难区别,但两者免疫组化特征不同,前者只表达x或入(免疫球蛋白的轻链),而后者同时表达k和入.有时恶性淋巴瘤与未分化癌不易区别,但如果采用免疫组化技术,即可发现前者白细胞共同抗原(LCA)阳性,角蛋白阴性,未分化癌则正好相反.

Ⅶ 什么是组织化学技术

免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

Ⅷ 免疫组织化学和免疫细胞化学的区别

组织是由细胞构成的，免疫细胞化学和免疫组织化学二者都是免疫学的分支，其实都一样啦，有什么好区别的。

Ⅸ 免疫组织化学结果:p16(+<1/2层>),ki-67(+,<1/2层>)是什么意思

免疫组织化学结果:p16(+<1/2层>),ki-67(+,<1/2层>)是什么意思?
p16、Ki-67联合应用可作为宫颈良性病变与CINⅠ以及CINⅠ与CINⅡ-Ⅲ鉴别的重要标记物，通俗来说就是宫颈良性病变的标志物。
意见建议：据您所述，病情还是有点严重的，建议及时治疗，控制病情，谨遵医嘱。希望此建议对您有所帮助。并祝您早日康复