化学发光图
❶ 关于光泽精化学发光法
常用的几种SOD检测方法:
1. 分光光度法
分光光度法是最为典型的检测SOD的方法,这种方法使用了细胞色素 C(cytochrome C)或者氮蓝四唑(NBT)(图1)。用cytochrome C的还原法来检测O2-是因为还原后的cytochrome C会生成紫色的染料(图解 2)。这是自SOD被发现以来最常用的方法。
Cyt(FeⅢ) + O2- — Cyt(FeⅡ) + O2
因为cytochrome C很容易被NADPH还原酶或者其他的还原剂所还原,因此必须要考虑样品的污染因素。而且,这种方法需要每隔1.5分钟就要察看一下,因此不适合做大批量的实验。NBT法的原理是生成不溶于水的蓝色甲臢染料(lmax: 560 nm)去和O2-反应。这种染料不溶于水,在做长时程分析时会生成不均一的沉淀物,从而影响实验数据的重现性。为了得到水溶性的甲臢染料,许多改良后的方法如添加BSA被人们所采用。但是,添加了不必要的蛋白质会使数据分析变得十分复杂,而且NBT会被多种还原剂所还原。NBT的这种特性被用于酮胺的检测,酮胺可以作为糖尿病的标记物并且是Maillard反应的中间体。NBT法的最大缺点是即使加入过量的SOD也不能获得100%的抑制率,原因是NBT会与黄嘌呤氧化酶直接反应。
2. 化学发光法
用于O2-检测的化学发光探针同样也能用于SOD的检测,这种探针分为2种,一种是光泽精,另一种是荧光素衍生物(MCLA)。这种化学发光反应对pH有高度的依赖性。例如,光泽精只有在pH 9.0或者更高处会发出强烈的化学光。因此,在生理的pH条件下用这种方法检测SOD是不可行的。另一方面,MCLA在生理条件下能够发出较强的化学荧光,因此可以用于人脑的Cu,Zn-SOD活性的检测。但是,MCLA不适合用作SOD检测的探针,因为它不单单和O2-反应,还会和单质氧反应。而且MCLA与溶解氧反应后会发出化学光,转移的金属离子还会加速氧化反应。
3.电子自旋共振(ESR)光谱法
在室温下,溶液中O2-的ESR信号不能直接被检测出,但能够通过自旋捕捉法间接获得。最常见的诱捕剂是5,5-dimethyl-1-pyrroline N-oxide(DMPO)。由于O2- 诱捕DMPO会产生一个特殊的光谱图,因此ESR法是O2-检测的方法中特异性最好的一种。然而,DMPO与O2-间的二阶速度常数比O2-自发反应常数相对要低,因此需要向溶液中加入大量的DMPO(如:终浓度为0.45M)。这样,每次试验所要用的DMPO将花去大笔的经费。
这种方法的另一个问题是在实验中需要一套较为昂贵的ESR设备。
4.利用水溶性四唑盐检测SOD的新方法
为了克服上述的诸多问题,我们在做SOD检测时需要考虑如下几个方面:实验设备要简单、经济,pH灵敏度要低,对O2-有高度的特异性。如果用分光光度计作为一种简单的实验设备的话,就需要一种与cytochrome C和NBT相似的比色探针。检测中最重要的一点是在没有其他物质干扰的情况下,测定出SOD100%的抑制率。为了得到一种新的检测SOD的方法,我们对还原后能生成水溶性甲臢的四唑盐作了一系列的实验
❷ 化验单上什么叫做化学发光
化学发光是物质在进行化学反应过程中伴随的一种光辐射现象,可以分为直接发光和间接发光。直接发光是最简单的化学发光反应,有两个关键步骤组成:即激发和辐射。
如A、B两种物质发生化学反应生成C物质,反应释放的能量被C物质的分子吸收并跃迁至激发态C*,处于激发的C*在回到基态的过程中产生光辐射。这里C*是发光体,此过程中由于C直接参与反应,故称直接化学发光。
间接发光又称能量转移化学发光,它主要由三个步骤组成:首先反应物A和B反应生成激发态中间体C*(能量给予体);当C*分解时释放出能量转移给F(能量接受体),使F被激发而跃迁至激发态F*;最后,当F*跃迁回基态时,产生发光。
(2)化学发光图扩展阅读
依据供能反应的特点,可将化学发光分析法分为:
1)普通化学发光分析法(供能反应为一般化学反应);
2)生物化学发光分析法(供能反应为生物化学反应;简称BCL);
3)电致化学发光分析法(供能反应为电化学反应,简称ECL)等。
根据测定方法该法又可分为:
1)直接测定CL分析法;
2)偶合反应CL分析法(通过反应的偶合,测定体系中某一组份);
3)时间分辨CL分析法(即利用多组份对同一化学发光反应影响的时间差实现多组份测定);
4)固相、气相、液相CL分析法;
5)酵联免疫CL分析法等。
参考资料来源:网络-化学发光法
参考资料来源:网络-化学发光
❸ 化学发光成像系统需要配置什么样的CCD相机
化学发光是物质在发生化学反应时产生的一种光辐射现象,根据其版特性,在生物学领权域中常被用来进行蛋白质与DNA的检测。化学发光成像系统相较具有高灵敏度、无材料损耗、自动曝光过程、电子图片存档等众多优势,但是,由于系统是依靠HRP或AP等特定的酶与底物结合来运作,因此所产生的光辐射比较微弱,相应的光信号的采集过程难度就大了不少。所以,想要获取到如此微弱的化学发光,就需要配置性能较高的CCD相机。
❹ 电化学发光电压和电化学发光图上有两个发光峰是什么原因
是要做电化学测试吧。最简单方法是查阅文献,直接选择文献中的电压窗口。 a)先把电压窗口设大一点,扫个CV,看看峰都处在哪里。进而逐步缩小电压窗口,直至达到自己分析测试目的。 b)如果是要来个EIS,电压一般不设置,即默认为开路OC。
❺ 在做Western blot进行化学发光检测时出现各种状况的结果图像,怎样分析这些图像以便知道问题所在
这个没法分析,你至少给个你的试验步骤吧。。每一步做的不对都是问题。。
而且你的结果是什么样子?无信号?杂信号?
❻ Western Blot 化学发光(ECL)为什么出现高背景
做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现,要弄清“背景太高”的原因,先要知道“背景”是什么,“背景”也是发光,影响发光的因素就会影响背景。
影响发光的因素主要有:1.含HRP的抗体;2.发光试剂;3.和发光试剂反应的杂质,如含杂质的膜。这里面,在很短时间内曝光造成的背景多是由于含HRP的抗体的因素造成的,抗体浓度过高,洗涤不充分,封闭不充分等都可以造成抗体在膜上的非特异结合,制造背景;转移膜包括最后曝光时包裹的塑料薄膜,含有杂质也会制造背景,这种背景较容易发现鉴别。
值得注意的是,发光试剂不好,也会制造背景,这在较长时间曝光的情况下明显,有人做过实验,在较长曝光(30分钟以上),优质的发光试剂背景明显较一般的发光试剂背景低,得到的图像也更漂亮,结果也更可靠。
对一些实验来说,如果实验结果本应是多条带,只是一些带由于蛋白量多较强,短时曝光即可检测,而另一些带由于蛋白量相对较少,需要长时间曝光才可检测,这时候主要的影响因素就是发光试剂,因为如果加大抗体的量,普通的发光试剂背景也会相应加大,影响较弱条带的检测,如果减少抗体的量,普通的发光试剂较弱条带不易检测,长时间曝光同样隐藏在背景之中。这时如果不知道还有较弱条带的存在,实验的结论实际上被发光试剂影响了。如果有能长时间曝光而低背景的发光试剂,那么得到的结果就会非常可靠。
所以,较好的抗体和实验过程,再采用优质的发光试剂,就可以减少背景,得到漂亮、真实、可靠的发光结果。
其余自己看:
http://www.engreen.com.cn/procts/ECL2.htm
❼ 电化学发光作图需要安静的环境吗
化学发光法:其是利用化学反应产生的能量进行激发发光,其具有仪器简单、检测限低、线性范围宽等优点,在化学分析方面应用广泛。与荧光法相比,化学发光法不需要外来的光源,从而减少了光散射,降低了噪音信号的干扰,提高了检测的灵敏度,扩大了线性动态范围。其缺点是选择性差,会对一个系列的化合物做出反应,而不是针对单个的某一化合物。另一个缺点是化学发光的发射强度依赖于各种环境因素,在不同的环境体系中,发射强度和时间的曲线有较大的差别,所以必须严格控制外界的各种因素。
❽ 化学发光免疫分析仪中国有几家在生产都是什么情况求了解,谢谢!
现在国产的有:1.深圳新产业(半自动做得一半,最近因全自动上市而日渐兴起)。2.北京源德(半自动设备在国内保有量很大,全自动在12年也上市了)。3.北京贝爱康(国内磁微粒发光法的典范,已经被源德收购)。4.北京科美东雅(半自动处在中游水平,全自动只是全自动加样加上了半自动发光组合而成,不是真正意义上的全自动,目前市场很一般)5.新波(国内时间分辨发光的代表《做时间分辨的还有个广州丰华,但市场表现比不上新波》,乙肝项目国内市场做的非常好,目前被PE收购)。6.郑州安图(安图生物技术基础一般,但是做市场的能力全国一流!设备水平一般,但是参数都做的很牛。目前市场总体做的不错,全自动也即将上市)。7.威海威高(半自动做的很烂,最近上市了200速的全自动,设备很大很漂亮,但是试剂情况以及实际使用情况还不明了,市场总体表现目前一般)。8.北京泰格科信,老牌的发光厂家(其试剂批号很全,甚至有批号但是做不出来试剂!技术水平一般,市场混乱,日益走低)。9.四川迈克(新上市的全自动,但是试剂种类非常少!目前还没有见过用户)。10.另外还有一些如北京大成、河北的康普生(只生产设备)等一些小厂家!
市场总体如此,写的比较简单,详细的可以私信我交流。
❾ 化学发光免疫分析仪中国有几家在生产都是什么情况
现在国产的有:
深圳新产业(半自动做得一半,最近因全自动上市而日渐兴起)。
北京源德(半自动设备在国内保有量很大,全自动在12年也上市了)。
北京贝爱康(国内磁微粒发光法的典范,已经被源德收购)。
北京科美东雅(半自动处在中游水平,全自动只是全自动加样加上了半自动发光组合而成,不是真正意义上的全自动,目前市场很一般)。
新波(国内时间分辨发光的代表《做时间分辨的还有个广州丰华,但市场表现比不上新波》,乙肝项目国内市场做的非常好,目前被PE收购)。
郑州安图(安图生物技术基础一般,但是做市场的能力全国一流!设备水平一般,但是参数都做的很牛。目前市场总体做的不错,全自动也即将上市)。
威海威高(半自动做的很烂,最近上市了200速的全自动,设备很大很漂亮,但是试剂情况以及实际使用情况还不明了,市场总体表现目前一般)。
北京泰格科信,老牌的发光厂家(其试剂批号很全,甚至有批号但是做不出来试剂!技术水平一般,市场混乱,日益走低)。
四川迈克(新上市的全自动,但是试剂种类非常少!目前还没有见过用户)。
另外还有一些如北京大成、河北的康普生(只生产设备)等一些小厂家。
❿ 有哪位大神解释一下电化学发光法,跪谢
化学发光法是分子发光光谱分析法中的一类,它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理,利用仪器对体系化学发光强度的检测,而确定待测物含量的一种痕量分析方法。
电化学发光分析法具有灵敏度高、仪器设备简单、操作方便、易于实现自动化等特点,广泛地应用于生物、医学、药学、临床、环境、食品、免疫和核酸杂交分析和工业分析等领域。
在21世纪中必将继续为解决人类面临的各种重大问题发挥更加显著的作用。
化学发光与其它发光分析的本质区别是体系产生发光 (光辐射) 所吸收的能量来源不同。
体系产生化学发光,必须具有一个产生可检信号的光辐射反应和一个可一次提供导致发光现象足够能量的单独反应步骤的化学反应。
(10)化学发光图扩展阅读
依据供能反应的特点,可将化学发光分析法分为:
1)普通化学发光分析法(供能反应为一般化学反应)。
2)生物化学发光分析法(供能反应为生物化学反应;简称BCL)。
3)电致化学发光分析法(供能反应为电化学反应,简称ECL)等。
根据测定方法该法又可分为:
1)直接测定CL分析法。
2)偶合反应CL分析法(通过反应的偶合,测定体系中某一组份)。
3)时间分辨CL分析法(即利用多组份对同一化学发光反应影响的时间差实现多组份测定)。
4)固相、气相、液相CL分析法。
5)酵联免疫CL分析法等。