分子生物耗材
① 请问生物实验耗材、试剂批发哪家公司比较好
上海恒远生物科技有限公司是一家生物高新技术企业，主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的研发、销售。公司专业代理美国R&D、Amresco、Sigma、Pharmacia、Abcam等各大品牌高质量试剂盒和生物科研试剂，产品涵盖ELISA试剂盒、生物试剂、抗体、对照品、血清、细胞、培养基、实验耗材等，公司产品几乎涉及所有领域，代表了最高品质。
② 请问在上海 买分子生物学实验耗材（DNTP Taq等）哪几家公司好
实验检验耗材（试管，离心管，包埋盒，吸头，培养皿，样品杯等）方野科技0576-84726375（潘小姐）
③ 生物学实验中为什么要对器具和耗材进行清洗和高温灭菌
主要是为了避免污染，因为很多器具和耗材会用到不同的实验中，及时清洗和高温灭菌可以防止和避免交叉污染，所导致的实验误差等……
④ 国内生产生物实验室耗材的公司有哪些最好是分子生物实验室的相关耗材，枪头类，管类等等
海门有挺多这种工厂的
⑤ Western blot实验需要准备什么试剂和耗材
1.1细胞
①将细胞培养皿置于冰上，用冰冷得PBS洗涤细胞2次
②吸出PBS，加入裂解液（碧云天P0013；1%TritonX-100；）
a.融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
b.对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。（一般10*7个细胞用100ul裂解后获得的上清蛋白浓度约为2-4mg/ml）
③用刮刀刮下贴壁细胞，转移至EP管，14000rpm离心5分钟
④将上清液转移至EP管，负20℃保存
1.2组织
①将组织样品剪成细小碎片（最好在冰上进行）
②加入裂解液
a.融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
c.按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
d.用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。如果组织样品本身细小，可适当剪切后直接加入裂解液，通过强烈涡旋使样品裂解充分
（每20mg冻存的小鼠肝脏组织用200微升本裂解液裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为15-25mg/ml，不同状态的不同组织有所不同）
③充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清
2. 蛋白定量（Thermo UF289356)
2.1稀释白蛋白(BSA)标准液的制备
2.2 制备BCA工作液（A液：B液=50：1 密闭室温可以保存一段时间）
总体积=（#标准孔+#未知孔）*#复孔*每个样本的体积
测试管每管2ml;96孔板每孔200ul。
2.3 浓度测定
①将25ul标准液和样本设置复孔加入96孔板，按照样本：BCA工作液（1：8）加入200ul BCA工作液(如果样本有限就加10ul比例用1：20；推荐每个待测的样本做2-3个平行反应；根据样品的浓度，可提前稀释5-10倍)
②最好摇匀30秒，将96孔板在37℃孵育30min
③冷却至室温，酶标仪设置为562nm，在5分钟内测试完所有的样本。
④所有的样本减去空白对照在562nm处的吸光度，绘制标准曲线，确定样本的浓度
3. 蛋白电泳
3.1 变性以及还原蛋白
在蛋白样品中加入含SDS（保证样品中的所有蛋白带电荷一致）的上样缓冲液，100℃加热煮沸。
3.1.1室温溶解蛋白上样缓冲液（5×），按照4 uL蛋白样品+1 ul (5×)的比例混合。
3.1.2 100℃或沸水浴加热10分钟，以充分变性蛋白
3.1.3 冰上骤冷，直接上样到SDS-PAGE胶加样孔即可
3.1.4通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近则可以停止电泳
4. SDS-PAGE凝胶电泳
4.1 胶的选择与制备（根据目的蛋白的大小，选择合适的分离胶的浓度）
4.2 配胶（碧云天P0012AC）
洗干净玻璃板，装板加水验漏后，晾干装到制胶架上。根据配方配胶。
（配胶顺序：先配分离胶（下层胶），充分凝固后，再配浓缩胶（上层胶））
4.2.2 配制浓缩胶（上层胶）
4.2.3 组装制胶器
①将制备好的分离胶灌入制胶板内（缓慢不要有气泡），随后缓慢加入适量异丙醇压平分离胶。
②20-30分钟分离胶凝聚完成，倾斜板，倒掉异丙醇，吸水纸吸去残余液体，弃去上层压胶的水或醇。
③加入配好的浓缩胶灌入制胶板内，然后插上梳子，20-30分钟浓缩胶即可凝聚。
④缓慢取出梳子，上样。
4.2.4 上样及电泳
①蛋白冰上溶解，调整蛋白浓度，和等体积5×上样缓冲液混合，即为上样液。用纯水冲洗胶板，放入电泳槽
②两块板之间倒入电泳液，确认无漏液
③迅速拔出梳子，用枪轻轻吹孔使碎片冲出
④依次加入蛋白marker和蛋白样品，每孔加上样液20ug，留一孔加预染的marker.加满电泳缓冲液，盖上槽盖，接通电源，先用70V恒压电泳，约30min,当指示剂溴酚蓝进入分离胶后改用90V恒压电泳，当指示剂到达距凝胶下端约0.5cm处时关闭电源，取出胶板。（上样时间尽量短，避免样品扩散，但也不能过快避免样品溢出而造成相邻加样孔的交叉污染，未加样的孔中加入等量的样品缓冲液）
⑤调节电泳的电压和时间，传统胶是上层胶80V，30min;下层胶120V 90-120min.
(为了防止蛋白条带再凝胶上扩散，电泳后应尽快转膜)
5. 转膜
将蛋白凝胶中的蛋白，通过电流作用转移到转印膜上。由于蛋白凝胶本身易碎，蛋白条带容易子啊凝胶中扩散，而且抗体也不易于进入凝胶中与目的蛋白结合，所以需要在转印膜这样的固相载体上实现后续封闭、洗涤，显色等实验操作。
5.1 转膜
①将减好的PVDF膜用无水甲醇润湿30秒以上，然后用dd H2O漂洗2min,浸泡于转移缓冲液中5min后开始后续操作
②装配转膜三明治结构（在转移缓冲液中制备三明治可以避免气泡的产生）
黑面（负极）→海绵垫→3层滤纸→凝胶→转印膜→3层滤纸→海绵垫→红面（正极），每层之间不能有气泡。然后将三明治转移至电泳槽中，黑面对黑面。