生物製品論文
1. 生物製品論文,各位大俠幫幫忙,每篇要3000到5000字,題目如下:
細胞培養的基本原理與技術
現代生物技術一般認為包括基因工程技術、細胞工程技術、酶工程技術和發酵工程技術,而這些技術的發展幾乎都與細胞培養有密切關系,特別是在醫葯領域的發展,細胞培養更具有特殊的作用和價值。比如基因工程葯物或疫苗在研究生產過程中很多是通過細胞培養來實現的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO細胞作為載體;細胞工程中更是離不細胞培養,雜交瘤單克隆抗體,完全是通過細胞培養來實現的,既使是現在飛速發展的基因工程抗體也離不開細胞培養。正在倍受重視的基因治療、體細胞治療也要經過細胞培養過程才能實現,發酵工程和酶工程有的也與細胞培養密切相關。總之,細胞培養在整個生物技術產業的發展中起到了很關鍵的核心作用。
第一節 體外培養的概念
一、基本概念 體外培養(in vitro culture),就是將活體結構成分或活的個體從體內或其寄生體內取出,放在類似於體內生存環境的體外環境中,讓其生長和發育的方法。
●組織培養:是指從生物體內取出活的組織(多指組織塊)在體外進行培養的方法。
●細胞培養:是指將活細胞(尤其是分散的細胞)在體外進行培養的方法。
●器官培養:是指從生物體內取出的器官(一般是胚胎器官)、器官的一部分或器官原基在體外進行培養的方法。
二、體內、外細胞的差異和分化
1.差異:細胞離體後,失去了神經體液的調節和細胞間的相互影響,生活在缺乏動態平衡相對穩定環境中,日久天長,易發生如下變化:分化現象減弱;形態功能趨於單一化或生存一定時間後衰退死亡;或發生轉化獲得不死性,變成可無限生長的連續細胞系或惡性細胞系。因此,培養中的細胞可視為一種在特定的條件下的細胞群體,它們既保持著與體內細胞相同的基本結構和功能,也有一些不同於體內細胞的性狀。實際上從細胞一旦被置於體外培養後,這種差異就開始發生了。
2.分化:體外培養的細胞分化能力並未完全喪失,只是環境的改變,細胞分化的表現和在體內不同。細胞是否表現分化,關鍵在於是否存在使細胞分化的條件,如Friend細胞(小鼠紅白血病細胞)在一定的因素作用下可以合成血紅蛋白,血管內皮細胞在類似基膜物質底物上培養時能長成血管狀結構,雜交瘤細胞能產生特異的單克隆抗體,這些均屬於細胞分化行為。
第二節 細胞培養的一般過程
一、准備工作 准備工作對開展細胞培養異常重要,工作量也較大,應給予足夠的重視,推備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。准備工作的內容包括器皿的清洗、乾燥與消毒,培養基與其他試劑的配製、分裝及滅菌,無菌室或超凈台的清潔與消毒,培養箱及其他儀器的檢查與調試。
二、取材 在無菌環境下從機體取出某種組織細胞(視實驗目的而定),經過一定的處理(如消化分散細胞、分離等)後接入培養器血中,這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的首次培養稱為原代培養。
理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用於培養,實際上幼體組織(尤其是胚胎組織)比成年個體的組織容易培養,分化程度低的組織比分化高的容易培養,腫瘤組織比正常組織容易培養。取材後應立即處理,盡快培養,因故不能馬上培養時,可將組織塊切成黃豆般大的小塊,置4℃的培養液中保存。取組織時應嚴格保持無菌,同時也要避免接觸其他的有害物質。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌,為減少污染可用抗菌素處理。
三、培養 將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。如系組織塊培養,則直接將組織塊接入培養器皿底部,幾個小時後組織塊可貼牢在底部,再加入培養基。如系細胞培養,一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數,按要求以一定的量(以每毫升細胞數表示)接入培養器皿並直接加入培養基。細胞進入培養器皿後,立即放入培養箱中,使細胞盡早進入生長狀態。
正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次,觀察的內容包括細胞是否生長良好,形態是否正常,有無污染,培養基的PH是否太酸或太鹼(由酚紅指示劑指示),此外對培養溫度和CO2濃度也要定時檢查。
原代培養一般有一段潛伏期(數小時到數十天不等),在潛伏期細胞一般不分裂,但可貼壁和遊走。過了潛伏期後細胞進入旺盛的分裂生長期。細胞長滿瓶底後要進行傳代培養,將一瓶中的細胞消化懸浮後分至兩到三瓶繼續培養。每傳代一次稱為「一代」。二倍體細胞一般只能傳幾十代,而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質,也可能僅有不死性(Immortality)而無惡性。
四、凍存及復甦 為了保存細胞,特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株,要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃,將細胞收集至凍存管中加入含保護劑(一般為二甲亞碸或甘油)的培養基,以一定的冷卻速度凍存,最終保存於液氮中。在極低的溫度下,細胞保存的時間幾乎是無限的。復甦一般採用快融方法,即從液氮中取出凍存管後,立即放入37℃水中,使之在一分鍾內迅速融解。然後將細胞轉入培養器皿中進行培養。
凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復甦時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。
五、常用儀器設備 無菌室,超凈工作台,三重純水蒸餾器,抽氣泵,壓力蒸氣消毒器,電熱恆溫培養箱,培養器具,CO2培養箱,恆溫水浴鍋,倒置顯微鏡,離心機,無菌過濾器,洗刷裝置,細胞計數板和電子細胞技術儀等等。
第三節 細胞培養的無菌環境
一、無菌室
無菌室的結構:一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成。
無菌室的消毒和防污染:為保持無菌狀態,經常消毒是必要的,通常採用每日(使用前)紫外照射(1-2小時),每周甲醛、乳酸、過氧乙酸熏蒸(2小時)和每月新潔爾滅擦拭地面和牆壁一次的方式進行消毒。實際工作中,要根據無菌室建築材料的差異來選擇合適的消毒方法。
此外,還應注意防止無菌室的污染。造成無菌室污染的可能包括:送入無菌室的風沒有被過濾除菌;進出無菌室時,能使外界空氣直接對流進無菌室的操作間;等。
二、超凈工作台
工作原理:鼓風機驅動空氣通過高效過濾器得以凈化,凈化的空氣被徐徐吹過檯面空間而將其中的塵埃、細菌甚至病毒顆粒帶走,使工作區構成無菌環境。根據氣流在超凈工作台的流動方向不同,可將超凈工作台分為側流式、直流式和外流式三種類型。
超凈台的使用與保養:超凈台的平均風速保持在0.32-0.48米/秒為宜,過大、過小均不利於保持凈化度;使用前最好開啟超凈台內紫外燈照射10-30分鍾,然後讓超凈台預工作10-15分鍾,以除去臭氧和使用工作檯面空間呈凈化狀態;使用完畢後,要用70%酒精將檯面和台內四周擦拭乾凈,以保證超凈台無菌。還要定期用福爾馬林熏蒸超凈台。
第四節 常用培養器皿及清洗消毒
細胞培養需要大量消耗性物品,如玻璃器皿、金屬器皿、塑料、橡膠製品、布類、紙類等,因此掌握清洗、消毒知識,學會清洗、消毒方法是從事細胞培養工作必須的。
一、清洗 離體條件下,有害物質直接同細胞接觸,細胞對任何有害物質十分敏感,極少殘留物都可以對細胞產生毒副作用。因此,新的或重新使用的器皿都必須認真清洗,達到不含任何殘留物的要求。
(一)玻璃器皿的清洗 一般經過浸泡、刷洗、浸酸、和清洗四個步驟。
1.浸泡:新的或用過的玻璃器皿要先用清水浸泡,軟化和溶解附著物。新玻璃器皿使用前得先用自來水簡單刷洗,然後用5%鹽酸浸泡過夜;用過的玻璃器皿往往附有大量蛋白質和油脂,乾涸後不易刷洗掉,故用後應立即浸入清水中備刷洗。
2.刷洗:將浸泡後的玻璃器皿放到洗滌劑水中,用軟毛刷反復刷洗。不要留死角,並防止破壞器皿表面的光潔度。將刷洗干凈的玻璃器皿洗凈、晾乾,備浸酸。
3.浸酸:浸酸是將上述器皿浸泡到清潔液中,又稱酸液,通過酸液的強氧化作用清除器皿表面的可能殘留物質。浸酸不應少於六小時,一般過夜或更長。放取器皿要小心。
4.沖洗:刷洗和浸酸後的器皿都必須用水充分沖洗,浸酸後器皿是否沖洗的干凈,直接影響到細胞培養的成敗。手工洗滌浸酸後的器皿,每件器皿至少要反復「注水-倒空」15次以上,最後用重蒸水浸洗2-3次,晾乾或烘乾後包裝備用。
(二)橡膠製品清洗
新的橡膠製品洗滌方法:0.5mol/L NaOH煮沸15分鍾,流水沖洗,0.5mol/L HCl煮沸15分鍾,流水沖洗,自來水煮沸2次,蒸餾水煮沸20分鍾,50℃烤乾備用。
(三)塑料製品的清洗
塑料製品特點:質軟、易出現劃痕;耐腐蝕能力強、但不耐熱。
清洗程序:使用器皿後立即用清水清洗,浸於自來水過夜,用紗布或棉簽和50℃清洗液刷洗,流水沖洗,晾乾,浸於清潔液15分鍾,流水沖洗(15-20遍),蒸餾水浸洗三次,雙蒸水泡24小時,晾乾備用。
(四)包裝:對細胞培養用品進行消毒前,要進行嚴密包裝,以便於消毒和貯存。常用的包裝材料:牛皮紙、硫酸紙、棉布、鋁飯盒、較大培養皿等,近幾年用鋁箔包裝,非常方便,適用。培養皿、注射器、金屬器械等用牛皮紙包裝後再裝入飯盒內,較大的器皿可以進行局部包紮。
二、消毒和滅菌 微生物污染是造成細胞培養失敗的主要原因
(一)物理消毒法
1.紫外線消毒:紫外線是一種低能量的電磁輻射,可殺死多種微生物。革蘭陰性菌最為敏感,其次是陽性菌,再次為芽孢,真菌孢子的抵抗力最強。紫外線的直接作用是通過破壞微生物的核酸及蛋白質等而使其滅活,間接作用是通過紫外線照射產生的臭氧殺死微生物。直接照射培養室消毒,用法簡單,效果好。
紫外燈的消毒效果同紫外燈的輻射強度和照射劑量呈正相關,輻射強度隨燈距離增加而降低,照射劑量和照射時間呈正比。因此紫外燈同被照射物的距離和照射時間要適合。離地面2米的30W燈可照射9平方米房間,每天照射2-3小時,期間可間隔30分鍾。燈管離地面2米以外要延長照射時間,2.5米照射效果較差。紫外燈照射工作台的距離不應超過1.5米,照射時間30分鍾為宜。
紫外燈不僅對皮膚、眼睛傷害,且對培養細胞與試劑等也產生不良影響,因此,不要開著紫外等操作。
2.高溫濕熱滅菌:壓力蒸汽滅菌是最常用的高溫濕熱滅菌方法。對生物材料有良好的穿透力,能造成蛋白質變性凝固而使微生物死亡。布類、物、璃器皿、屬器皿、膠和某些培養液都可以用這方法滅菌。
不同壓力蒸汽所達到的溫度不同,不同消毒物品所需的有效消毒壓力和時間不同。從壓力蒸汽消毒器中取出消毒好的物品(不包括液體),應立即放到60-70℃烤箱內烘乾,再貯存備用,否則,潮濕的包裝物品表面容易為微生物污染。煮沸消毒也是常用的濕熱消毒方法,它具有條件簡單、使用方便等特點。
3.高溫乾熱消毒:乾熱滅菌主要是將電熱烤箱內物品加熱到160℃以上,並保持90-120分鍾,殺死細菌和芽孢,達到滅菌目的。主要用於滅菌玻璃器皿(如體積較大的燒杯、培養瓶)、金屬器皿以及不能與蒸汽接觸的物品(如粉劑、油劑)。
乾熱滅菌後要關掉開關並使物品逐漸冷卻後在打開,切忌立即打開,以免溫度驟變而使箱內的玻璃器皿破裂。干烤箱內物品間要有空隙,物品不要靠近加熱裝置。
燒灼也是滅菌方法之一,常利用檯面上的酒精燈的火焰對金屬器皿及玻璃器皿口緣進行燒灼消毒。
4.過濾除菌:是將液體或氣體用微孔薄膜過濾,使大於孔徑的細菌等微生物顆粒阻留,從而達到除菌目的。在體外培養時,過濾除菌大多用於遇熱容易變性而失效的試劑或培養液。目前,大多實驗室採用微孔濾膜濾器除菌。關鍵步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程。
(二)化學消毒:新潔而滅,其0.1%水溶液可對器械、皮膚、操作表面進行擦拭和浸泡消毒。
(三)抗生素消毒:抗生素主要用於消毒培養液,是培養過程中預防微生物污染的重要手段,也是微生物污染不嚴重時的「急救」方法。不同抗生素殺滅微生物不同,應根據需要選擇。
可用於細胞培養的消毒滅菌方法很多,但每種方法都有一定的適應范圍。如常用的過濾除菌系統、紫外照射、電子殺菌燈、乳酸、甲醛熏蒸等手段消毒實驗室空氣;多用新潔而滅消毒實驗室地面;常用乾熱、濕熱消毒劑浸泡、紫外照射等方法消毒培養用器皿;採用高壓蒸汽滅菌或過濾除菌方法消毒培養液。
2. 生物制葯畢業論文
朋友,你可以去生物谷看看,搜集一些論文相關的材料,再結合自己的實驗過程撰寫一篇屬於自己的論文。例如你想寫一篇有關糖類葯物的論文,可以著手查找有關糖類的葯物(包括已經臨床推上市場的),在實驗室內進行短周期的實驗猜想及論證。這樣對你的學業、今後的工作都很有幫助!
3. 生物制葯專業論文
我也是這個專業的本科生,已經畢業。
請問你是寫本科論文吧。
據我了解,本科論文是需要進行實驗的,不能僅僅是調研性質的論文,不知道你們學校具體要求是怎樣》
生物制葯新制劑的研究和生物制葯新方法的研究,比較好寫。類似於一個綜述,但似乎不太符合畢業論文的要求。
糖類葯物,脂類葯物,氨基酸類葯物,維生素類葯物,動植物類葯物的分離與提取,這類事屬於分離純化,但太寬泛了一些,而且涉及的種類太多了,最好就其中某一類中的某幾種展開。
生物製品類葯物細胞因子類葯物,基因工程類葯物,這一類題目還是很貼切的,比較好。
生物檢驗制劑盒的研究,這個研究意義不大。
希望對你有幫助
找了一篇已經發到你郵箱了
4. 生物制葯論文,5000字左右
海洋生物來源葯物先導化合物的研究進展
【摘要】 海洋生物中活性物質豐富,本篇文章對國內外近3年來從海洋生物中分離提取到的萜類化合物以及糖苷類化合物進行了歸納,並對其研究趨勢進行了展望。這些新發現的萜類化合物廣泛分布於海藻、珊瑚、海綿以及一些海洋真菌等海洋生物中,主要以單萜、倍半萜、二萜、三萜結構型式存在;而糖苷類化合物在海藻、海綿、海參、海星等海洋生物中發現大部分以糖苷脂、甾體糖苷、萜類糖苷型式存在。
【關鍵詞】 海洋生物 萜類化合物 糖苷類 生物活性
【Abstract】 Marine organism show some important biological activities. This paper reviews terpenoids and glycosides from marine organism at home and abroad since 2005, and provides scientific evidence for reasonable exploitation and application. Terpenoids are mainly occurred on marine algae, coral, sponge and some fungi by monoterpene, sesquiterpene, diterpene and triterpene. And glycosides with structures of lipid, steroid and terpenoid are distributed to marine algae, sponge, sea cucumber and starfish.
【Key words】 Marine organism; terpenoid; glycoside; bioactivity
海洋是生命之源,由於海洋環境的特殊性,具有高壓、低營養、低溫(特別是深海)、無光照以及局部高溫、高鹽等生命極限環境,海洋生物適應了海洋獨特的生活環境,必然造就了海洋生物具有獨特的代謝途徑和遺傳背景,必定也會有新的、在許多陸地生物中未曾發現過的新結構類型和特殊生物活性的化合物。
萜類物質是一類天然的烴類物質,其分子中具有異戊二烯(C5H8)的基本單位。故凡由異戊二烯衍生的化合物,其分子式符合(C5H8)n通式的均稱萜類化合物(terpenoids)或異戊二烯類化合物(isopenoids)。但有些情況下,在分子合成過程中由於正碳離子引起的甲基遷移或碳架重排以及烷基化、降解等原因,分子的某一片斷會不完全遵照異戊二烯規律產生出一些變形碳架,它們仍屬於萜類化合物。海洋生物中萜類化合物主要以單萜、倍半萜、二萜、二倍半萜為主,三萜和四萜種類和數量都較少,且大部分以糖苷形式存在。萜類化合物是海洋生物活性物質的重要組成部分,廣泛分布於海藻、珊瑚、海綿、軟體動物等海洋生物中,具有細胞毒性、抗腫瘤活性、殺菌止痛等活性作用。
糖苷的分類有多種方法,按照在生物體內是原生的還是次生的可將其分為原生糖苷和次生糖苷(從原生糖苷中脫掉一個以上的苷稱為次生苷或次級苷);按照糖苷中含有的單糖基的個數可將糖苷分為單糖苷、雙糖苷、三糖苷等;按照糖苷的某些特殊化學性質或生理活性可將糖苷分為皂苷、強心苷等;按照苷元化學結構類型可分為黃酮糖苷、蒽醌糖苷、生物鹼糖苷、三萜糖苷等,海洋類的糖苷大部分是按照此特點分類的,主要包括鞘脂類糖苷、甾體糖苷、萜類糖苷和大環內酯糖苷等,在很多海洋生物如海藻、珊瑚、海參、海綿等中均發現有糖苷類化合物存在。已有的研究表明海洋糖苷類成分大都具有抗腫瘤、抗病毒、抗炎、抗菌、增強免疫力等生物活性。抗白血病和艾氏癌葯物阿糖胞苷Ara-C(D-arabinosyl cytosine) 1、抗病毒葯物的Ara - A 2以及Ara-C的N4-C16-19飽和脂肪醯基化衍生物3是海洋糖苷類葯物成功開發的典範〔1〕。
本篇文章對國內外自2005年來從海洋生物中分離提取到的萜類化合物以及糖苷類化合物進行了總結。
1 萜類化合物
1.1 單萜 2005年M. G. Knott等人〔2〕對從紅藻Plocamium corallorhiza中分離得到的三種多鹵代單萜化合物plocoralides A-C(1~3)〔3,4〕進行了活性研究,發現化合物Plocaralides B(2), C(3)對食管癌細胞WHCOI具有中等強度的細胞毒作用,這些化合物具有鹵素取代基。
1.2 倍半萜 從海泥來源的真菌Emericella variecolor GF10的發酵液中分離得到兩個新型的倍半萜化合物6-epi-ophiobolin G(4)和6-epi-ophiobolin N(5),化合物在1~3μM濃度時能使神經癌細胞Neuro 2A凋亡,同時伴隨細胞萎縮和染色體聚集〔5〕。這一類ophiobolins是天然的三環或四環的倍半萜化合物,對線蟲、真菌、細菌以及腫瘤細胞有著普遍的抑制活性。
Willam Fenical等人從海洋沉積物分離得到一株放線菌CNH-099,在該菌的代謝產物中分離到具有細胞毒作用的新穎的 marinonc 衍生物 neomarinone(6)、isomarinone(7)、hydroxydebromomarinone(8)和methoxydeuromomarinonc(9),它們均是倍半萜萘醌類抗生素。Neomarinone(6)和marinones(7~9)對HCrll6結腸癌細胞顯示中等程度的體外細胞毒作用(IC50=8μg/ml),而且,neomarinone(6)對NCI-s60癌細胞也具有中等程度細胞毒作用(IC50=10μg/ml)〔6〕。
化合物花側柏烯倍半萜(10~12)從希臘北愛情海希俄斯島採集的紅藻 L. microcladia中分離得到〔7〕。紅藻 L. microcladia 經有機溶劑CH2Cl2/MeOH (3:1)提取,以Cyclohexane/EtOAc(9:1)為洗脫液進行硅膠柱層析,最後經HPLC純化得到化合物(10-12)。該試驗並對化合物活性進行了研究,發現三種化合物均對肺癌細胞NSCLC-N6 和 A-549有抑製作用,化合物(10):IC50=196.9 μM (NSCLC-N6)和242.8 μM (A-549),化合物(11):IC50 = 73.4μM (NSCLC-N6) 和52.4 μM (A-549) ,化合物(12):IC50= 83.7 μM (NSCLC-N6)和81.0 μM (A-549)。後兩個化合物對肺癌細胞毒活性作用明顯高於第一個化合物,推測可能由於後兩個化合物結構中酚羥基以及五環內雙鍵的存在提高了化合物活性,而化合物中溴原子的存在並沒有對其活性構成影響。從中國南京採集的紅藻L. okamurai也分離出四種衍生的花側柏烯倍半萜化合物,分別是Laureperoxide (13), 10-bromoisoaplysin (14), isodebromolaurinterol (15)和10-hydroxyisolaurene (16)〔8〕。5種snyderane倍半萜(17~21)化合物從紅藻L. luzonensis中分離得到〔9〕。
從一個軟海綿種屬Halichondria sp中分離得到四種具有抗微生物活性的含氮桉烷倍半萜化合物halichonadins A-D(22~25)〔10〕。該海綿採集於日本沖繩運天港,2.5 kg樣品溶於4L MeOH,所得的115g MeOH提取物分別用1200ml EtOAc和400MlH2O萃取,7.9g EtOAc萃取物經硅膠柱層析後,洗脫液為MeOH/CHCl3(95:5)和石油醚/乙醚(9:1),得到化合物halichonadins A-D(22~25)和已知化合物acanthenes B、C。活性檢測實驗顯示:化合物halichonadins A-D均具有抗細菌活性,同時halichonadins B和C也具有抗真菌活性,化合物halichonadins C對新型隱球菌(Cryptococcus neoformans)的半致死濃度(IC50)達到0.0625μg/ml。三個部分環化的倍半萜(26~28)化合物具有抑制磷酸酶Cdc25B活性,從海綿Thorectandra sp.中分離得到〔11〕。冷凍的海綿樣品經4℃去離子水浸泡冷凍乾燥後得到的乾涸物, 隨後用MeOH/CH2Cl2(1:1)和MeOH/H2O(9:1)的有機溶劑提取獲得粗提物。採用活性追蹤的方式,對粗提物(IC50=8μg/ml)進一步分離,將其溶於100mlMeOH/H2O(9:1)有機溶劑中,得到1.2g的粗提物加入300ml正己烷,獲得水相部分溶於MeOH/H2O(7:3)的溶劑中,再用300ml CH2Cl2提取得到的部分經活性測定顯示對磷酸酯酶抑制活性最強(IC50=6μg/ml),之後採用反相C-18柱HPLC分離,得到部分環化的倍半萜化合物(26)16-oxo-luffariellolide(12mg, tR=18min),化合物(27) 16-hydroxy-luffariellolide (2.5 mg, tR=19min)以及化合物(28) luffariellolide (4.20mg, tR=38min)。五種屬於倍半萜類的化合物hyrtiosins A-E (29~33),從中國海南兩個不同地方的海綿Hyrtios erecta種屬中分離得到〔12〕。
氧化的倍半萜化合物gibberodione(34), peroxygibberol(35) 和 sinugibberodiol(36)從台灣軟珊瑚Sinularia gibberosa分離得到〔13〕,化合物(35)具有較溫和的細胞毒性〔14〕。從珊瑚Eunicea sp.中提取的七種倍半萜代謝產物(37~43)〔15〕,含有欖烷,桉烷和吉瑪烷骨架結構,研究顯示對Eunicea 種屬的瘧原蟲具有輕度的抑製作用。
1.3 二萜 以前很少有從綠藻中分離得到萜類化合物的報道,但是與2004年相比,提取的代謝產物數量有所增加〔16〕。從澳大利亞塔斯馬尼亞採集的綠藻Caulerpa brownii中分離出許多新型二萜類化合物,其中化合物(44~48)在沒有分支的綠藻中提取得到〔17〕,而類酯萜化合物(49)是從分支的綠藻中獲得,該研究同時顯示提取的類酯萜化合物對細胞、魚類、微生物均有不同程度的毒性作用〔18〕。
日本Koyama K等人從褐藻Ishige okamurae來源的未知海洋真菌(MPUC 046)中分離到一種新型的二萜類化合物phomactin H(50)〔19〕。真菌(MPUC 046)經含150g小麥的400ml海水25℃發酵培養31天後,採用CHCl3溶劑提取、硅膠層析及HPLC純化得到phomactin H。該化合物同已發現的phomactin A-G化合物一樣,均屬於血小板活化因子(PAF)拮抗劑,能抑制PAF誘導的血小板凝聚,同時推測此活性與化合物的某個特定骨架結構有關。
從法國南部大西洋海濱採集的褐藻Bifurcaria bifurcata中分離得到(51~55)五種新型的極性非環狀二萜類化合物〔20〕。該褐藻經CHCl3/MeOH(1:1)提取,硅膠層析(洗脫液為不同比例的Hexane,EtOAc,MeOH),經反相C-18柱HPLC純化獲得十二種化合物,其中五種為新型二萜類化合物。化合物(51~53)在Hexane: EtOAc(2:3)洗脫液中發現,而化合物(54)和(55)則從Hexane: EtOAc(1:4)洗脫液中獲得。
6種新型的Dactylomelane二萜類化合物 (56~61)從西班牙特納里夫南部家那利群島採集的紅藻Laurencia中分離得到〔21〕,其結構具有C-6到C-11環化的單環碳新型結構。採集的紅藻經CH2Cl2/MeOH(1:1)有機溶劑提取後,用洗脫液Hexane/CHCl3/MeOH(2:1:1)進行Sephadex LH-20反相色譜分離,結合TLC點樣篩選的部分用洗脫液EtOAc/hexane(1:4)進行硅膠柱層析,最後採用硅膠柱進行HPLC純化得到六種新型的單環碳二萜類化合物Dactylomelans。從紅藻L. luzonensis中也分離得到二萜類化合物luzodiol (62)〔9〕。一個溴代二萜類化合物 (63)從日本其他紅藻Laurencia物種中分離得到 〔22〕。
Xenicane二萜類化合物(64~71)從台灣珊瑚Xenia blumi分離出來,而化合物xeniolactones A-C (72~74)則是從台灣Xenia florida中分離出來的〔23〕。化合物 (64~67), (69), (70) 和 (72)具有輕微的細胞毒性作用。非Xenicane代謝產物xenibellal (75)對Xenia umbellata也具有輕微的細胞毒性作用〔24〕。化合物Confertdiate (76)是一個四環的二萜類物質,從中國珊瑚Sinularia conferta中分離得到〔25〕。
從史密森尼博物院癌症研究所收集的海葵中分離得到的二萜類化合物actiniarins A-C (77~79)能適度抑制人cdc25B磷酸酶重組〔26〕。 Periconicins A,B (80~81)〔27〕是從內生紅樹林真菌Periconia sp.分離得到的二萜類的新化合物,能抑制不同微生物的生長活性,諸如bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6358p, Staphylococcus epidermis ATCC 12228等等。
南海真菌2492#是從采自香港紅樹林植物Phiagmites austrah樣品中分離得到的,從2492#菌株的發酵液中分離得到的兩種二萜類化合物 (82~83)有很好的生理活性〔28〕,如抗腫瘤、降壓、調整心率失常,同時降壓調整心率失常的作用在相同的條件下優於臨床現用的陽性對照物。
從中國紅樹林植物Bruguiera gymnorrhiza分離出二萜類化合物 (84~86),化合物(86)對小鼠成纖維細胞具有適當的細胞毒活性〔29〕。也從中國紅樹林另一物種Bruguiera sexangula var. rhynchopetala分離出三種二萜類化合物 (87~89) 〔30〕。與之結構相似的二萜類化合物 (90~93)從中國Bruguiera gymnorrhiza中分離得到,其中化合物 (92)和 (93)有輕微的細胞毒活性〔31〕。
1.4 二倍半萜 Willam Fenical研究小組從麴黴屬Aspergillus海洋真菌(菌株編號CNM-713)分離到一個新的二倍半萜化合物aspergilloxide (94),該化合物為含有25個碳原子的新骨架,對人的結腸癌細胞HCT-116有微弱的細胞毒活性〔32〕。在此之前,Willam Fenical等人從巴哈馬的紅樹林中的漂浮木中也分離到一株真菌Fusarium heterosporum CNC-477, 並從中分離得到一系列多羥基二倍半萜類化合物neomangicols A-C(95~97)〔33〕和mangicols A-G (98~104)〔6〕,它們的結構如下圖所示。Neomangicols的骨架為25個碳的二倍半萜,是首次從天然物中分離得到。葯理實驗顯示化合物 (96)具有和慶大黴素大致相當的對革蘭陽性細菌的抑制能力,化合物 (98)和 (99)對MPA(phorbol myristate acetate)誘導的鼠類耳朵水腫有抗炎症活性。1.5 三萜 從海洋生物中提取得到的三萜類化合物主要以三萜皂苷、三萜烯類、三萜糖苷等形式存在。四環三萜皂苷類化合物nobilisidenol (105) 和 (106)是從中國黑乳海參Holothuria nobilis分離得到的〔34〕。採集於福建東山的黑乳海參洗凈切碎後用85%的EtOH冷浸提取,得到的流浸膏均勻分散於水中,依次用石油醚、二氯甲烷、n-BuOH萃取,研究發現n-BuOH提取物經大孔吸附樹脂、正相硅膠層析、反相C-18硅膠柱層析以及反相C-18 柱HPLC分離得到三萜皂苷類化合物nobilisidenol (105)和(106)。易楊華等同時從海參中提取到了其它的三萜糖苷類化合物以及三萜皂苷脫硫衍生物〔35,36〕。三萜烯類化合物intercedensides D-I(107-112)從中國海參Mensamaria intercedens中分離得到,具有細胞毒功能〔37〕。紐西蘭海參Australostichopus mollis是單硫酸酯三萜糖甙化合物mollisosides A(113), B1(114) 和 B2(115)的來源〔38〕。
具有細胞溶解作用的三萜類化合物sodwanone S (116)是從印度洋多毛島採集的海綿Axinella weltneri中分離得到的〔39〕。三萜苷類化合物sarasinosides J-M (117-120)分離自印尼蘇拉威西島採集的海綿Melophlus sarassinorum,對B. subtilis和S. cerevisae的細菌具有抗微生物活性作用〔40〕。
2 糖苷類化合物
從中國海南採集的甲藻A. carterae中分離得到一種不飽和的糖基甘油酯化合物(121)〔41〕。甲藻採集於中國海南三亞,經分離篩選得到的A. carterae大規模培養後用甲苯/MeOH(1:3)的有機溶劑提取,所得乾涸物分別用甲苯、1N NaCl 水溶液提取。研究發現有機相提取物經硅膠柱(洗脫液為不同比例的MeOH/CHCl3)、反相C-18硅膠柱層析(洗脫液為MeOH/H2O=9:1),最後經反相C-18柱制備型HPLC(流動相為MeOH/H2O =95:5)分離純化得到25mg不飽和的糖基甘油酯化合物(121)。從多米尼克普次矛斯採集的綠藻Avrainvillea nigricans中可以分離出一個甘油酯avrainvilloside(122),該化合物含有6-脫氧-6-氨基糖苷部分〔42〕。
兩個甘油一酯化合物homaxinolin(123)和(124),磷脂醯膽鹼homaxinolin(125)以及能抑制細胞生長的脂肪酸(126)是從韓國海綿Homaxinella sp.中分離得到的〔43〕。從紅海採集的海綿Erylus lendenfeldi分離得到的兩個甾體糖苷類化合物erylosides K(127)和L(128)能選擇性的抑制酵母菌株的rad50芽體,rad50能修復協調受損的雙鏈DNA〔44〕。
海參Stichopus japonicus是五種糖苷化合物SJC-1(129),SJC-2(130), SJC-3(131), SJC-4(132) 和 SJC-5(133)的主要來源〔45〕。五種化合物均從弱極性CHCl3/MeOH部分分離出來,其中SJC-1(129), SJC-2(130), SJC-3(131)是典型的鞘甘醇或植物型鞘甘醇葡萄糖腦苷脂類化合物,含有羥基化或非羥基化的脂肪醯基結構。SJC-4(132) 和 SJC-5(133)也含有羥基化的脂肪醯基結構,但是含有獨特的鞘甘醇基團,是兩種新型的葡萄糖腦苷脂類化合物。Linckiacerebroside A(134)是從日本海星Linckia laevigata分離出的一種新型糖苷脂化合物〔46〕。
甾體糖苷孕甾-5, 20-二烯-3β-醇-3-O-α-L-吡喃岩藻糖苷(135) 和 孕甾-5, 20-二烯-3β-醇-3-O-β-D-吡喃木糖苷(136)從中國短足軟珊瑚Cladiella sp.中分離得到〔47〕。將新鮮的軟珊瑚干質量 1.6 kg用乙醇在室溫下浸泡 3 次, 合並提取液, 減壓濃縮後得到深褐色浸膏 166.5g用30%的甲醇溶解後, 依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取, 石油醚提取液經減壓濃縮後得棕黑色膠狀物 62.5g,將此提取物硅膠柱減壓層析, 用石油醚乙酸乙酯溶劑體系梯度洗脫, 從石油醚/乙酸乙酯(20:80)洗脫液中所得的洗脫部分在反相C-18柱上進行HPLC分離, 用MeOH洗脫得到化合物60mg(135)和3mg(136),該類化合物具有抗早孕和抑制腫瘤細胞生長活性。
四種甾體糖苷化合物(137-140)是從中國珊瑚Junceella juncea EtOH/CH2Cl2提取液中分離得到〔48〕。
3 結語
目前,從海洋生物中發現的萜類和糖苷類天然化合物的數量近幾年呈現逐漸增加的趨勢,有些化合物的活性確切而且活性作用強烈是很有希望的一些葯物先導化合物,但是用於臨床研究的化合物還相對較少,因此開發更多新的天然化合物是有必要的。其次,從海洋生物中發現的活性化合物也存在著活性較低或毒性較大等問題,可以通過對其結構進行修飾,使其活性達到最佳效果。此外,從海洋生物中提取的活性化合物含量通常較低,而且化合物在提取過程中受到提取試劑、方法等外界因素的影響,所以採用化學合成的方法進行化合物的半合成或者全合成解決化合物在提取過程中結構易變、試劑耗量大等缺點。例如從海洋真菌中發現的結構新穎,有抗菌、抗癌和神經心血管活性的物質頭孢菌素C,就是從海洋真菌中分離得到的,這是一大類半合成的廣為人知的抗生素,它已廣泛用於臨床〔49〕。所以採用合成或半合成的方法解決活性化合物作為葯源的大量生產方式是通行的。我們期待著這些葯物先導化合物在葯物開發方面發揮重要作用。
5. 細胞生產生物製品3000字論文
細胞生產生物製品論文同學,有,。。
6. 關於生物制葯的畢業論文
還要你自己找課題啊,我們都是老師指定的。
要是學校有條件話自己動手做一個驗證性試驗,這樣寫出來的論文更有說服力。
7. 有關生物制葯專業的畢業論文3000字
生物制葯的研究與發展(生物技術論文)
http://www.maomaoxue.com/soft/sort010/Information-181.html
摘 要:生物技術已經深入中葯研究和開發的各個領域,在科技高速發展的現代社會里,中葯要想存在就必須實行現代化,因此生物制葯在制葯行業就顯得尤為重要,而發展生物制葯將會形成一個大的趨勢
關鍵詞:生物制葯;研究;發展
Abstract:Biotechnology has been widely used in the research and development of chinese medicine on all side.In the high development of sciences,especially modern society,only by being modern,can the chinese medcine exits.So the biology pharmacy becomes more importment in the pharmsncy instry and developing biology phsrmsry will be a big trend.
Key words:biology phsrmsry; rearch; development
8. 急需關於生物制葯的論文
海洋生物來源葯物先導化合物的研究進展
【摘要】 海洋生物中活性物質豐富,本篇文章對國內外近3年來從海洋生物中分離提取到的萜類化合物以及糖苷類化合物進行了歸納,並對其研究趨勢進行了展望。這些新發現的萜類化合物廣泛分布於海藻、珊瑚、海綿以及一些海洋真菌等海洋生物中,主要以單萜、倍半萜、二萜、三萜結構型式存在;而糖苷類化合物在海藻、海綿、海參、海星等海洋生物中發現大部分以糖苷脂、甾體糖苷、萜類糖苷型式存在。
【關鍵詞】 海洋生物 萜類化合物 糖苷類 生物活性
【Abstract】 Marine organism show some important biological activities. This paper reviews terpenoids and glycosides from marine organism at home and abroad since 2005, and provides scientific evidence for reasonable exploitation and application. Terpenoids are mainly occurred on marine algae, coral, sponge and some fungi by monoterpene, sesquiterpene, diterpene and triterpene. And glycosides with structures of lipid, steroid and terpenoid are distributed to marine algae, sponge, sea cucumber and starfish.
【Key words】 Marine organism; terpenoid; glycoside; bioactivity
海洋是生命之源,由於海洋環境的特殊性,具有高壓、低營養、低溫(特別是深海)、無光照以及局部高溫、高鹽等生命極限環境,海洋生物適應了海洋獨特的生活環境,必然造就了海洋生物具有獨特的代謝途徑和遺傳背景,必定也會有新的、在許多陸地生物中未曾發現過的新結構類型和特殊生物活性的化合物。
萜類物質是一類天然的烴類物質,其分子中具有異戊二烯(C5H8)的基本單位。故凡由異戊二烯衍生的化合物,其分子式符合(C5H8)n通式的均稱萜類化合物(terpenoids)或異戊二烯類化合物(isopenoids)。但有些情況下,在分子合成過程中由於正碳離子引起的甲基遷移或碳架重排以及烷基化、降解等原因,分子的某一片斷會不完全遵照異戊二烯規律產生出一些變形碳架,它們仍屬於萜類化合物。海洋生物中萜類化合物主要以單萜、倍半萜、二萜、二倍半萜為主,三萜和四萜種類和數量都較少,且大部分以糖苷形式存在。萜類化合物是海洋生物活性物質的重要組成部分,廣泛分布於海藻、珊瑚、海綿、軟體動物等海洋生物中,具有細胞毒性、抗腫瘤活性、殺菌止痛等活性作用。
糖苷的分類有多種方法,按照在生物體內是原生的還是次生的可將其分為原生糖苷和次生糖苷(從原生糖苷中脫掉一個以上的苷稱為次生苷或次級苷);按照糖苷中含有的單糖基的個數可將糖苷分為單糖苷、雙糖苷、三糖苷等;按照糖苷的某些特殊化學性質或生理活性可將糖苷分為皂苷、強心苷等;按照苷元化學結構類型可分為黃酮糖苷、蒽醌糖苷、生物鹼糖苷、三萜糖苷等,海洋類的糖苷大部分是按照此特點分類的,主要包括鞘脂類糖苷、甾體糖苷、萜類糖苷和大環內酯糖苷等,在很多海洋生物如海藻、珊瑚、海參、海綿等中均發現有糖苷類化合物存在。已有的研究表明海洋糖苷類成分大都具有抗腫瘤、抗病毒、抗炎、抗菌、增強免疫力等生物活性。抗白血病和艾氏癌葯物阿糖胞苷Ara-C(D-arabinosyl cytosine) 1、抗病毒葯物的Ara - A 2以及Ara-C的N4-C16-19飽和脂肪醯基化衍生物3是海洋糖苷類葯物成功開發的典範〔1〕。
本篇文章對國內外自2005年來從海洋生物中分離提取到的萜類化合物以及糖苷類化合物進行了總結。
1 萜類化合物
1.1 單萜 2005年M. G. Knott等人〔2〕對從紅藻Plocamium corallorhiza中分離得到的三種多鹵代單萜化合物plocoralides A-C(1~3)〔3,4〕進行了活性研究,發現化合物Plocaralides B(2), C(3)對食管癌細胞WHCOI具有中等強度的細胞毒作用,這些化合物具有鹵素取代基。
1.2 倍半萜 從海泥來源的真菌Emericella variecolor GF10的發酵液中分離得到兩個新型的倍半萜化合物6-epi-ophiobolin G(4)和6-epi-ophiobolin N(5),化合物在1~3μM濃度時能使神經癌細胞Neuro 2A凋亡,同時伴隨細胞萎縮和染色體聚集〔5〕。這一類ophiobolins是天然的三環或四環的倍半萜化合物,對線蟲、真菌、細菌以及腫瘤細胞有著普遍的抑制活性。
Willam Fenical等人從海洋沉積物分離得到一株放線菌CNH-099,在該菌的代謝產物中分離到具有細胞毒作用的新穎的 marinonc 衍生物 neomarinone(6)、isomarinone(7)、hydroxydebromomarinone(8)和methoxydeuromomarinonc(9),它們均是倍半萜萘醌類抗生素。Neomarinone(6)和marinones(7~9)對HCrll6結腸癌細胞顯示中等程度的體外細胞毒作用(IC50=8μg/ml),而且,neomarinone(6)對NCI-s60癌細胞也具有中等程度細胞毒作用(IC50=10μg/ml)〔6〕。
化合物花側柏烯倍半萜(10~12)從希臘北愛情海希俄斯島採集的紅藻 L. microcladia中分離得到〔7〕。紅藻 L. microcladia 經有機溶劑CH2Cl2/MeOH (3:1)提取,以Cyclohexane/EtOAc(9:1)為洗脫液進行硅膠柱層析,最後經HPLC純化得到化合物(10-12)。該試驗並對化合物活性進行了研究,發現三種化合物均對肺癌細胞NSCLC-N6 和 A-549有抑製作用,化合物(10):IC50=196.9 μM (NSCLC-N6)和242.8 μM (A-549),化合物(11):IC50 = 73.4μM (NSCLC-N6) 和52.4 μM (A-549) ,化合物(12):IC50= 83.7 μM (NSCLC-N6)和81.0 μM (A-549)。後兩個化合物對肺癌細胞毒活性作用明顯高於第一個化合物,推測可能由於後兩個化合物結構中酚羥基以及五環內雙鍵的存在提高了化合物活性,而化合物中溴原子的存在並沒有對其活性構成影響。從中國南京採集的紅藻L. okamurai也分離出四種衍生的花側柏烯倍半萜化合物,分別是Laureperoxide (13), 10-bromoisoaplysin (14), isodebromolaurinterol (15)和10-hydroxyisolaurene (16)〔8〕。5種snyderane倍半萜(17~21)化合物從紅藻L. luzonensis中分離得到〔9〕。
從一個軟海綿種屬Halichondria sp中分離得到四種具有抗微生物活性的含氮桉烷倍半萜化合物halichonadins A-D(22~25)〔10〕。該海綿採集於日本沖繩運天港,2.5 kg樣品溶於4L MeOH,所得的115g MeOH提取物分別用1200ml EtOAc和400MlH2O萃取,7.9g EtOAc萃取物經硅膠柱層析後,洗脫液為MeOH/CHCl3(95:5)和石油醚/乙醚(9:1),得到化合物halichonadins A-D(22~25)和已知化合物acanthenes B、C。活性檢測實驗顯示:化合物halichonadins A-D均具有抗細菌活性,同時halichonadins B和C也具有抗真菌活性,化合物halichonadins C對新型隱球菌(Cryptococcus neoformans)的半致死濃度(IC50)達到0.0625μg/ml。三個部分環化的倍半萜(26~28)化合物具有抑制磷酸酶Cdc25B活性,從海綿Thorectandra sp.中分離得到〔11〕。冷凍的海綿樣品經4℃去離子水浸泡冷凍乾燥後得到的乾涸物, 隨後用MeOH/CH2Cl2(1:1)和MeOH/H2O(9:1)的有機溶劑提取獲得粗提物。採用活性追蹤的方式,對粗提物(IC50=8μg/ml)進一步分離,將其溶於100mlMeOH/H2O(9:1)有機溶劑中,得到1.2g的粗提物加入300ml正己烷,獲得水相部分溶於MeOH/H2O(7:3)的溶劑中,再用300ml CH2Cl2提取得到的部分經活性測定顯示對磷酸酯酶抑制活性最強(IC50=6μg/ml),之後採用反相C-18柱HPLC分離,得到部分環化的倍半萜化合物(26)16-oxo-luffariellolide(12mg, tR=18min),化合物(27) 16-hydroxy-luffariellolide (2.5 mg, tR=19min)以及化合物(28) luffariellolide (4.20mg, tR=38min)。五種屬於倍半萜類的化合物hyrtiosins A-E (29~33),從中國海南兩個不同地方的海綿Hyrtios erecta種屬中分離得到〔12〕。
氧化的倍半萜化合物gibberodione(34), peroxygibberol(35) 和 sinugibberodiol(36)從台灣軟珊瑚Sinularia gibberosa分離得到〔13〕,化合物(35)具有較溫和的細胞毒性〔14〕。從珊瑚Eunicea sp.中提取的七種倍半萜代謝產物(37~43)〔15〕,含有欖烷,桉烷和吉瑪烷骨架結構,研究顯示對Eunicea 種屬的瘧原蟲具有輕度的抑製作用。
1.3 二萜 以前很少有從綠藻中分離得到萜類化合物的報道,但是與2004年相比,提取的代謝產物數量有所增加〔16〕。從澳大利亞塔斯馬尼亞採集的綠藻Caulerpa brownii中分離出許多新型二萜類化合物,其中化合物(44~48)在沒有分支的綠藻中提取得到〔17〕,而類酯萜化合物(49)是從分支的綠藻中獲得,該研究同時顯示提取的類酯萜化合物對細胞、魚類、微生物均有不同程度的毒性作用〔18〕。
日本Koyama K等人從褐藻Ishige okamurae來源的未知海洋真菌(MPUC 046)中分離到一種新型的二萜類化合物phomactin H(50)〔19〕。真菌(MPUC 046)經含150g小麥的400ml海水25℃發酵培養31天後,採用CHCl3溶劑提取、硅膠層析及HPLC純化得到phomactin H。該化合物同已發現的phomactin A-G化合物一樣,均屬於血小板活化因子(PAF)拮抗劑,能抑制PAF誘導的血小板凝聚,同時推測此活性與化合物的某個特定骨架結構有關。
從法國南部大西洋海濱採集的褐藻Bifurcaria bifurcata中分離得到(51~55)五種新型的極性非環狀二萜類化合物〔20〕。該褐藻經CHCl3/MeOH(1:1)提取,硅膠層析(洗脫液為不同比例的Hexane,EtOAc,MeOH),經反相C-18柱HPLC純化獲得十二種化合物,其中五種為新型二萜類化合物。化合物(51~53)在Hexane: EtOAc(2:3)洗脫液中發現,而化合物(54)和(55)則從Hexane: EtOAc(1:4)洗脫液中獲得。
6種新型的Dactylomelane二萜類化合物 (56~61)從西班牙特納里夫南部家那利群島採集的紅藻Laurencia中分離得到〔21〕,其結構具有C-6到C-11環化的單環碳新型結構。採集的紅藻經CH2Cl2/MeOH(1:1)有機溶劑提取後,用洗脫液Hexane/CHCl3/MeOH(2:1:1)進行Sephadex LH-20反相色譜分離,結合TLC點樣篩選的部分用洗脫液EtOAc/hexane(1:4)進行硅膠柱層析,最後採用硅膠柱進行HPLC純化得到六種新型的單環碳二萜類化合物Dactylomelans。從紅藻L. luzonensis中也分離得到二萜類化合物luzodiol (62)〔9〕。一個溴代二萜類化合物 (63)從日本其他紅藻Laurencia物種中分離得到 〔22〕。
Xenicane二萜類化合物(64~71)從台灣珊瑚Xenia blumi分離出來,而化合物xeniolactones A-C (72~74)則是從台灣Xenia florida中分離出來的〔23〕。化合物 (64~67), (69), (70) 和 (72)具有輕微的細胞毒性作用。非Xenicane代謝產物xenibellal (75)對Xenia umbellata也具有輕微的細胞毒性作用〔24〕。化合物Confertdiate (76)是一個四環的二萜類物質,從中國珊瑚Sinularia conferta中分離得到〔25〕。
從史密森尼博物院癌症研究所收集的海葵中分離得到的二萜類化合物actiniarins A-C (77~79)能適度抑制人cdc25B磷酸酶重組〔26〕。 Periconicins A,B (80~81)〔27〕是從內生紅樹林真菌Periconia sp.分離得到的二萜類的新化合物,能抑制不同微生物的生長活性,諸如bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6358p, Staphylococcus epidermis ATCC 12228等等。
南海真菌2492#是從采自香港紅樹林植物Phiagmites austrah樣品中分離得到的,從2492#菌株的發酵液中分離得到的兩種二萜類化合物 (82~83)有很好的生理活性〔28〕,如抗腫瘤、降壓、調整心率失常,同時降壓調整心率失常的作用在相同的條件下優於臨床現用的陽性對照物。
從中國紅樹林植物Bruguiera gymnorrhiza分離出二萜類化合物 (84~86),化合物(86)對小鼠成纖維細胞具有適當的細胞毒活性〔29〕。也從中國紅樹林另一物種Bruguiera sexangula var. rhynchopetala分離出三種二萜類化合物 (87~89) 〔30〕。與之結構相似的二萜類化合物 (90~93)從中國Bruguiera gymnorrhiza中分離得到,其中化合物 (92)和 (93)有輕微的細胞毒活性〔31〕。
1.4 二倍半萜 Willam Fenical研究小組從麴黴屬Aspergillus海洋真菌(菌株編號CNM-713)分離到一個新的二倍半萜化合物aspergilloxide (94),該化合物為含有25個碳原子的新骨架,對人的結腸癌細胞HCT-116有微弱的細胞毒活性〔32〕。在此之前,Willam Fenical等人從巴哈馬的紅樹林中的漂浮木中也分離到一株真菌Fusarium heterosporum CNC-477, 並從中分離得到一系列多羥基二倍半萜類化合物neomangicols A-C(95~97)〔33〕和mangicols A-G (98~104)〔6〕,它們的結構如下圖所示。Neomangicols的骨架為25個碳的二倍半萜,是首次從天然物中分離得到。葯理實驗顯示化合物 (96)具有和慶大黴素大致相當的對革蘭陽性細菌的抑制能力,化合物 (98)和 (99)對MPA(phorbol myristate acetate)誘導的鼠類耳朵水腫有抗炎症活性。1.5 三萜 從海洋生物中提取得到的三萜類化合物主要以三萜皂苷、三萜烯類、三萜糖苷等形式存在。四環三萜皂苷類化合物nobilisidenol (105) 和 (106)是從中國黑乳海參Holothuria nobilis分離得到的〔34〕。採集於福建東山的黑乳海參洗凈切碎後用85%的EtOH冷浸提取,得到的流浸膏均勻分散於水中,依次用石油醚、二氯甲烷、n-BuOH萃取,研究發現n-BuOH提取物經大孔吸附樹脂、正相硅膠層析、反相C-18硅膠柱層析以及反相C-18 柱HPLC分離得到三萜皂苷類化合物nobilisidenol (105)和(106)。易楊華等同時從海參中提取到了其它的三萜糖苷類化合物以及三萜皂苷脫硫衍生物〔35,36〕。三萜烯類化合物intercedensides D-I(107-112)從中國海參Mensamaria intercedens中分離得到,具有細胞毒功能〔37〕。紐西蘭海參Australostichopus mollis是單硫酸酯三萜糖甙化合物mollisosides A(113), B1(114) 和 B2(115)的來源〔38〕。
具有細胞溶解作用的三萜類化合物sodwanone S (116)是從印度洋多毛島採集的海綿Axinella weltneri中分離得到的〔39〕。三萜苷類化合物sarasinosides J-M (117-120)分離自印尼蘇拉威西島採集的海綿Melophlus sarassinorum,對B. subtilis和S. cerevisae的細菌具有抗微生物活性作用〔40〕。
2 糖苷類化合物
從中國海南採集的甲藻A. carterae中分離得到一種不飽和的糖基甘油酯化合物(121)〔41〕。甲藻採集於中國海南三亞,經分離篩選得到的A. carterae大規模培養後用甲苯/MeOH(1:3)的有機溶劑提取,所得乾涸物分別用甲苯、1N NaCl 水溶液提取。研究發現有機相提取物經硅膠柱(洗脫液為不同比例的MeOH/CHCl3)、反相C-18硅膠柱層析(洗脫液為MeOH/H2O=9:1),最後經反相C-18柱制備型HPLC(流動相為MeOH/H2O =95:5)分離純化得到25mg不飽和的糖基甘油酯化合物(121)。從多米尼克普次矛斯採集的綠藻Avrainvillea nigricans中可以分離出一個甘油酯avrainvilloside(122),該化合物含有6-脫氧-6-氨基糖苷部分〔42〕。
兩個甘油一酯化合物homaxinolin(123)和(124),磷脂醯膽鹼homaxinolin(125)以及能抑制細胞生長的脂肪酸(126)是從韓國海綿Homaxinella sp.中分離得到的〔43〕。從紅海採集的海綿Erylus lendenfeldi分離得到的兩個甾體糖苷類化合物erylosides K(127)和L(128)能選擇性的抑制酵母菌株的rad50芽體,rad50能修復協調受損的雙鏈DNA〔44〕。
海參Stichopus japonicus是五種糖苷化合物SJC-1(129),SJC-2(130), SJC-3(131), SJC-4(132) 和 SJC-5(133)的主要來源〔45〕。五種化合物均從弱極性CHCl3/MeOH部分分離出來,其中SJC-1(129), SJC-2(130), SJC-3(131)是典型的鞘甘醇或植物型鞘甘醇葡萄糖腦苷脂類化合物,含有羥基化或非羥基化的脂肪醯基結構。SJC-4(132) 和 SJC-5(133)也含有羥基化的脂肪醯基結構,但是含有獨特的鞘甘醇基團,是兩種新型的葡萄糖腦苷脂類化合物。Linckiacerebroside A(134)是從日本海星Linckia laevigata分離出的一種新型糖苷脂化合物〔46〕。
甾體糖苷孕甾-5, 20-二烯-3β-醇-3-O-α-L-吡喃岩藻糖苷(135) 和 孕甾-5, 20-二烯-3β-醇-3-O-β-D-吡喃木糖苷(136)從中國短足軟珊瑚Cladiella sp.中分離得到〔47〕。將新鮮的軟珊瑚干質量 1.6 kg用乙醇在室溫下浸泡 3 次, 合並提取液, 減壓濃縮後得到深褐色浸膏 166.5g用30%的甲醇溶解後, 依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取, 石油醚提取液經減壓濃縮後得棕黑色膠狀物 62.5g,將此提取物硅膠柱減壓層析, 用石油醚乙酸乙酯溶劑體系梯度洗脫, 從石油醚/乙酸乙酯(20:80)洗脫液中所得的洗脫部分在反相C-18柱上進行HPLC分離, 用MeOH洗脫得到化合物60mg(135)和3mg(136),該類化合物具有抗早孕和抑制腫瘤細胞生長活性。
四種甾體糖苷化合物(137-140)是從中國珊瑚Junceella juncea EtOH/CH2Cl2提取液中分離得到〔48〕。
3 結語
目前,從海洋生物中發現的萜類和糖苷類天然化合物的數量近幾年呈現逐漸增加的趨勢,有些化合物的活性確切而且活性作用強烈是很有希望的一些葯物先導化合物,但是用於臨床研究的化合物還相對較少,因此開發更多新的天然化合物是有必要的。其次,從海洋生物中發現的活性化合物也存在著活性較低或毒性較大等問題,可以通過對其結構進行修飾,使其活性達到最佳效果。此外,從海洋生物中提取的活性化合物含量通常較低,而且化合物在提取過程中受到提取試劑、方法等外界因素的影響,所以採用化學合成的方法進行化合物的半合成或者全合成解決化合物在提取過程中結構易變、試劑耗量大等缺點。例如從海洋真菌中發現的結構新穎,有抗菌、抗癌和神經心血管活性的物質頭孢菌素C,就是從海洋真菌中分離得到的,這是一大類半合成的廣為人知的抗生素,它已廣泛用於臨床〔49〕。所以採用合成或半合成的方法解決活性化合物作為葯源的大量生產方式是通行的。我們期待著這些葯物先導化合物在葯物開發方面發揮重要作用。