分子生物耗材
① 請問生物實驗耗材、試劑批發哪家公司比較好
上海恆遠生物科技有限公司是一家生物高新技術企業，主要從事免疫學、分子生物學和常規生化試劑的研發、銷售。公司專業代理美國R&D、Amresco、Sigma、Pharmacia、Abcam等各大品牌高質量試劑盒和生物科研試劑，產品涵蓋ELISA試劑盒、生物試劑、抗體、對照品、血清、細胞、培養基、實驗耗材等，公司產品幾乎涉及所有領域，代表了最高品質。
② 請問在上海 買分子生物學實驗耗材（DNTP Taq等）哪幾家公司好
實驗檢驗耗材（試管，離心管，包埋盒，吸頭，培養皿，樣品杯等）方野科技0576-84726375（潘小姐）
③ 生物學實驗中為什麼要對器具和耗材進行清洗和高溫滅菌
主要是為了避免污染，因為很多器具和耗材會用到不同的實驗中，及時清洗和高溫滅菌可以防止和避免交叉污染，所導致的實驗誤差等……
④ 國內生產生物實驗室耗材的公司有哪些最好是分子生物實驗室的相關耗材，槍頭類，管類等等
海門有挺多這種工廠的
⑤ Western blot實驗需要准備什麼試劑和耗材
1.1細胞
①將細胞培養皿置於冰上，用冰冷得PBS洗滌細胞2次
②吸出PBS，加入裂解液（碧雲天P0013；1%TritonX-100；）
a.融解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鍾內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM，或者根據實驗需要加入適當的上述蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物。
b.對於貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸動物細胞1-2秒後，細胞就會被裂解。（一般10*7個細胞用100ul裂解後獲得的上清蛋白濃度約為2-4mg/ml）
③用刮刀刮下貼壁細胞，轉移至EP管，14000rpm離心5分鍾
④將上清液轉移至EP管，負20℃保存
1.2組織
①將組織樣品剪成細小碎片（最好在冰上進行）
②加入裂解液
a.融解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鍾內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM，或者根據實驗需要加入適當的上述蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物。
c.按照每20毫克組織加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。)
d.用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。如果組織樣品本身細小，可適當剪切後直接加入裂解液，通過強烈渦旋使樣品裂解充分
（每20mg凍存的小鼠肝臟組織用200微升本裂解液裂解後獲得的上清，其蛋白濃度約為15-25mg/ml，不同狀態的不同組織有所不同）
③充分裂解後，10000-14000g離心3-5分鍾，取上清
2. 蛋白定量（Thermo UF289356)
2.1稀釋白蛋白(BSA)標准液的制備
2.2 制備BCA工作液（A液：B液=50：1 密閉室溫可以保存一段時間）
總體積=（#標准孔+#未知孔）*#復孔*每個樣本的體積
測試管每管2ml;96孔板每孔200ul。
2.3 濃度測定
①將25ul標准液和樣本設置復孔加入96孔板，按照樣本：BCA工作液（1：8）加入200ul BCA工作液(如果樣本有限就加10ul比例用1：20；推薦每個待測的樣本做2-3個平行反應；根據樣品的濃度，可提前稀釋5-10倍)
②最好搖勻30秒，將96孔板在37℃孵育30min
③冷卻至室溫，酶標儀設置為562nm，在5分鍾內測試完所有的樣本。
④所有的樣本減去空白對照在562nm處的吸光度，繪制標准曲線，確定樣本的濃度
3. 蛋白電泳
3.1 變性以及還原蛋白
在蛋白樣品中加入含SDS（保證樣品中的所有蛋白帶電荷一致）的上樣緩沖液，100℃加熱煮沸。
3.1.1室溫溶解蛋白上樣緩沖液（5×），按照4 uL蛋白樣品+1 ul (5×)的比例混合。
3.1.2 100℃或沸水浴加熱10分鍾，以充分變性蛋白
3.1.3 冰上驟冷，直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔即可
3.1.4通常電泳至藍色染料到達膠的底端處附近則可以停止電泳
4. SDS-PAGE凝膠電泳
4.1 膠的選擇與制備（根據目的蛋白的大小，選擇合適的分離膠的濃度）
4.2 配膠（碧雲天P0012AC）
洗干凈玻璃板，裝板加水驗漏後，晾乾裝到制膠架上。根據配方配膠。
（配膠順序：先配分離膠（下層膠），充分凝固後，再配濃縮膠（上層膠））
4.2.2 配製濃縮膠（上層膠）
4.2.3 組裝制膠器
①將制備好的分離膠灌入制膠板內（緩慢不要有氣泡），隨後緩慢加入適量異丙醇壓平分離膠。
②20-30分鍾分離膠凝聚完成，傾斜板，倒掉異丙醇，吸水紙吸去殘余液體，棄去上層壓膠的水或醇。
③加入配好的濃縮膠灌入制膠板內，然後插上梳子，20-30分鍾濃縮膠即可凝聚。
④緩慢取出梳子，上樣。
4.2.4 上樣及電泳
①蛋白冰上溶解，調整蛋白濃度，和等體積5×上樣緩沖液混合，即為上樣液。用純水沖洗膠板，放入電泳槽
②兩塊板之間倒入電泳液，確認無漏液
③迅速拔出梳子，用槍輕輕吹孔使碎片沖出
④依次加入蛋白marker和蛋白樣品，每孔加上樣液20ug，留一孔加預染的marker.加滿電泳緩沖液，蓋上槽蓋，接通電源，先用70V恆壓電泳，約30min,當指示劑溴酚藍進入分離膠後改用90V恆壓電泳，當指示劑到達距凝膠下端約0.5cm處時關閉電源，取出膠板。（上樣時間盡量短，避免樣品擴散，但也不能過快避免樣品溢出而造成相鄰加樣孔的交叉污染，未加樣的孔中加入等量的樣品緩沖液）
⑤調節電泳的電壓和時間，傳統膠是上層膠80V，30min;下層膠120V 90-120min.
(為了防止蛋白條帶再凝膠上擴散，電泳後應盡快轉膜)
5. 轉膜
將蛋白凝膠中的蛋白，通過電流作用轉移到轉印膜上。由於蛋白凝膠本身易碎，蛋白條帶容易子啊凝膠中擴散，而且抗體也不易於進入凝膠中與目的蛋白結合，所以需要在轉印膜這樣的固相載體上實現後續封閉、洗滌，顯色等實驗操作。
5.1 轉膜
①將減好的PVDF膜用無水甲醇潤濕30秒以上，然後用dd H2O漂洗2min,浸泡於轉移緩沖液中5min後開始後續操作
②裝配轉膜三明治結構（在轉移緩沖液中制備三明治可以避免氣泡的產生）
黑面（負極）→海綿墊→3層濾紙→凝膠→轉印膜→3層濾紙→海綿墊→紅面（正極），每層之間不能有氣泡。然後將三明治轉移至電泳槽中，黑面對黑面。