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㈠ elisa实验都有哪些参考文献

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㈡ 石家庄好的软件公司有吗

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那么国内软件外包公司排行榜是怎么样的呢?下面为大家介绍排名靠前的原因

1、报价适中

提供同样服务的公司，一家报价高，一家报价适中，毫无疑问大家都会选择报价适中的商家。因而价格也是涉及到软件外包公司能否排名靠前的因素之一。

2、开发实力强

由于本身具备先进的技术实力，能够针对用户的需求制定出合理完善的解决方案，客户口碑好，受欢迎程度高，因而开发实力能使外包服务商排名遥遥领先。

3、服务流程完整

拥有完整服务流程的外包公司通常不存在着软件架构不合理、平台管理不善以及开发人员经验不足等问题，因而在其他条件对等的情况下，软件外包公司常常能排名靠前。

4、良好的服务态度

一个好的服务团队特别注重细节服务，做到每一个细节都用心考究，虽然这些并不明显，但是这才是一个好的团队的服务态度，为了打造最好的用户体验。

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㈢ 沙鼠的科学实验

【摘要】目的 研究沙鼠短暂性脑缺血及西比灵干预后脑内Smad2和Smad4蛋白的表达。方法 制作沙鼠脑缺血再灌注模型，用免疫组化法检测脑内Smad2、Smad4蛋白的表达变化。结果 各组沙鼠神经元和胶质细胞胞浆内均有Smad2、Smad4蛋白阳性表达，且Smad4蛋白表达均显著强于Smad2蛋白。缺血再灌注6h、1天后Smad2、Smad4蛋白表达显著上调(P<0.05)。同脑缺血组相比，西比灵干预组20只沙鼠神经元和神经胶质细胞内Smad2和Smad4蛋白在缺血再灌注6h、1天时表达明显下调(P<0.05)。结论 沙鼠脑神经细胞和神经胶质细胞内均有Smad2、Smad4蛋白表达；西比灵干预后，缺血再灌注沙鼠脑神经细胞和神经胶质细胞内Smad2和Smad4蛋白表达下调。提示Smad2和Smad4蛋白可能是缺血性脑损伤程度的又一重要标志；Smad4、Smad2在沙鼠脑缺血的发生和发展过程中可能有协同作用。
【关键词】Smad蛋白；免疫组化；缺血再灌注；沙鼠
体内外实验均证明，转化生长因子β有神经保护作用。脑缺血后，脑组织内TGF-β表达增高，是机体对缺血性脑损伤的一种保护性反应。TGF-β1增高能减少脑梗死面积，抵御脑缺血性损伤。Smad蛋白是辅助TGF-β超家族信号在细胞内传导的一族蛋白，包括了Smad2、Smad4等；直接参与TGF-β超家族成员的信号传导，是TGF-β超家族成员参与生命活动的重要介质。我们通过免疫组化技术测定沙鼠正常脑组织；缺血再灌注后脑组织及西比灵干预后缺血再灌注后脑组织及Smad2/4转录水平的表达,初步发现了Smad2、Smad4之间的关系，现报告如下。
材料方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 健康雄性蒙古沙鼠60只，9月龄，体重（90±5）g，购自上海实验动物管理委员会。随机分为正常组、假手术组、脑缺血组及西比灵干预组。
1.1.2 主要试剂 Smad2、Smad4免疫组化检测试剂盒，一抗(鼠IgG)，二抗(羊抗鼠IgG)，抗原修复液I，山羊血清封闭液、SABC等和DAB显色试剂盒均由武汉博士德生物工程有限公司提供；西比灵胶囊由西安杨森医药公司提供。
1.1.3 主要仪器 石蜡切片机、免疫组化专用盖玻片(武汉博士德生物工程有限公司提供)、恒温箱、冰箱、显微镜、照相机等。
1.2 实验步骤和方法
1.2.1 动物模型的建立 健康雄性蒙古沙鼠，用3%戊巴比妥以30mg/kg的剂量腹腔注射进行麻醉，固定动物，消毒，颈正中切开皮肤1.5cm左右，钝性分离皮下组织，分离双侧颈总动脉，微血管夹夹闭双侧颈总动脉10min后松夹再灌注，缝合皮肤。
1.2.2 动物的分组和处置 正常组10只，不予任何处理即断头处死动物。假手术组10只，仅分离双侧的颈总动脉，不予夹闭，就缝合皮肤，1天后断头处死。脑缺血组：共20只沙鼠，分为缺血6h组（IR6h）、缺血1天组（IRld）两组，每组10只，分别在缺血再灌注(IR)6h、1天时间点处死动物。西比灵干预组共20只沙鼠，分为IR6h,IRld两组，每组n=10，在缺血再灌注前一天给予喂食西比灵[按20mg/(kg·d)]。分别在缺血再灌注(IR)6h、1天时间点处死动物。所有实验动物在预定时间断头处死，快速取前脑置10%福尔马林固定,常规石蜡包埋后5μm连续切片。
1.2.3 结果判定 病理结果采用相邻脑组织切片作常规HE染色，用光镜观察其组织病理变化，估计脑损伤程度。免疫组化取各组沙鼠断面水平相似的连续组织切片，所有切片分析均在同一强度、同一放大倍数下进行，每个指标采用阳性细胞计数法。在40×10倍的光镜视野下观察免疫反应，以细胞浆着棕褐色为阳性，每张切片在高倍视野下分别取上、下、左、右及中心共5个区域进行细胞计数, 每个区计数200个细胞, 共计数1000个细胞, 计算染色细胞所占比例，即为Smad2、Smad4表达指数。
1.3 统计学分析 各组检测结果用单因素方差分析方法，2个独立样本用t检验，两变量间相关关系用直线相关分析，计算Pearson相关系数;确定P<0.05差异有显著性；所有统计分析均用SPSS11.0统计软件包完成。
结果
2.1 病理观察结果 正常组和假手术组皮层组织形态结构正常。脑缺血组IR6h可见部分神经元和胶质细胞轻度水肿；IRld后神经元出现变性、灶性坏死、胶质细胞轻度增生。西比灵治疗组:IR6h、IRId各组分别同脑缺血组相应时间点相比，脑组织损伤程度均明显轻于脑缺血组。
2.2 免疫组化结果 所有正常沙鼠脑组织神经元和神经胶质细胞内均有Smad2和Smad4蛋白不同程度的阳性表达，多呈棕黄色颗粒;颗粒主要定位于胞浆，部分定位于胞核。但表达程度有所不同，Smad4蛋白表达强于Smad2蛋白，统计差异有显著性(P<0.05)。在缺血再灌注沙鼠脑组织中，神经元和神经胶质细胞内也有不同程度的Smad2和Smad4蛋白的阳性表达，表达部位与正常组基本一致，Smad4蛋白表达也高于Smad2蛋白，统计差异有显著性(P<0.05)。缺血再灌注组（IR6h、IR1D）与正常组、假手术组比较，Smad2和Smad4蛋白阳性表达率增高，统计差异有显著性(P<0.05)。西比灵干预组Smad2和Smad4蛋白阳性表达率低于同时间点的脑缺血组，高于同时间点的正常对照组，统计差异均有显著性(P<0.05)（图1、2；表1）。表1 各组Smad2和Smad4蛋白表达指数比较 注：与正常对照组比较，▲P<0.05；与同时间点缺血组比较，△P<0.05；与各组Smad4蛋白比较，*P<0.05
讨论
Smad蛋白质群是发现的新的细胞内信号传导蛋白，它们直接参与TGF-β超家族成员的信号传导。已发现的Smad蛋白至少有10种，在哺乳动物中有8种，Smad1～Smad8。其中，参与调节TGF-β的Smads包括Smad1,2,3和4。Smad2由Eppert等于1996年从人肾cDNA文库中克隆获得，其C端含有SSXS结构，SSXS结构能被特异的丝氨酸激酶I型受体磷酸化，进而参与信号传导。Smad4C端不含SSXS结构，它不能特异地介导信号传导，但它能与Smad1,2,3,5和8等结合后协同激活各自的特异靶基因，因此也称为协同Smad；当TGF-β受体活化后，可以诱导限制途径Smad2和Smad3通过细胞膜特异的丝氨酸/苏氨酸激酶受体活化而发生磷酸化，再与共有型Smad4结合成寡聚体转运到细胞核，在细胞核直接地应答TGF-β的转录功能，这一结构是TGF-β细胞内信号的开关。
国内外已有研究Smad2和Smad4蛋白在心肌细胞、肝细胞、牙乳头细胞和胃癌等细胞和组织中有表达，但沙鼠脑组织中是否存在Smad2和Smad4蛋白表达尚未见文献报道。本实验用免疫组化方法检测到正常沙鼠脑组织神经细胞和神经胶质细胞胞浆和胞核内均有Smad2和Smad4蛋白表达，Smad4蛋白表达强于Smad2蛋白，两者差异有显著性。这表明Smad2和Smad4蛋白作为TGF-β在细胞内信号转导的分子，在于沙鼠神经细胞及神经胶质细胞中是必需的，神经细胞及神经胶质细胞需要Smad2和Smad4蛋白的表达才能发挥正常功能。而Smad4蛋白表达高于Smad2蛋白的可能原因是Smad4蛋白是TGFβ信号通路的共同通路有关。Smad2和Smad4蛋白在缺血再灌注6h，1天时沙鼠神经细胞、神经胶质细胞胞浆和胞核内也均有表达，且较正常沙鼠神经细胞、神经胶质细胞胞浆和胞核内的表达有明显上调，两者差异有显著性。进一步分析发现Smad2和Smad4蛋白在缺血第1天时间点表达比在缺血第6h时间点表达更明显(P<0.05)。脑缺血再灌注后Smad2和Smad4蛋白表达升高的可能原因我们认为是：脑缺血再灌注后，脑组织发生损害，氧自由基等有害物质表达增加，机体为了抵御这些有害因子，反应性地上调一些保护性因子，这其中就有TGF-β1。Smad2和Smad4蛋白是TGF-β1信号转导的必需分子，故当TGF-β1表达上调时，可能需要更多Smad2和Smad4蛋白来转导具有脑保护作用的TGF-β1的信号，而1天时TGF-β1表达较6h更高，Smad2和Smad4表达也相应增多。统计还发现，正常对照组、缺血组沙鼠脑神经细胞和神经胶质细胞内Smad4蛋白和Smad2蛋白表达存在正相关关系，其Pearson相关系数为0.582，这提示Smad4蛋白和Smad2蛋白在正常沙鼠脑组织内及脑缺血的发生和发展过程中可能有协同作用，这与大多数研究一致。西比灵是经典的钙离子拮抗剂，它有明显的脑保护作用。西比灵可有效的抑制神经细胞膜受体依赖性Ca2+通道开放，具有神经保护作用，并具有减轻皮质抑制，缩短恢复时间，防止脑组织缺血性改变的功能，增加脑组织对缺氧的耐受性。已有研究表明，西比灵发挥脑保护是通过以下机制实现的:西比灵可增加脑组织对缺氧的耐受性，有神经细胞保护作用；抑制病理性血管收缩，阻止血小板聚集，抗自由基作用，拮抗兴奋性氨基酸作用；改善脑循环，减轻脑水肿；避免再灌注性损伤[6]。由于Smad是TGF-β信号转导通路必需的，故阐明正常、缺血沙鼠脑组织内Smad4和Smad2蛋白的表达水平有助于加深对TGF-β胞内信号转导机制的理解，也有助于深入阐明脑缺血缺氧的发病机制，为其进一步深入分子水平的研究与治疗打下基础。
使其聪明
《美国实验生物学联合会会志》发布一项新的研究成果称：“有证据表明，如果我们能够聪明的吃，我们就会变得更聪明”。麻省理工大学的科学家指出，从婴儿配方奶粉到鸡蛋等日常饮食中吸取的营养成分，能够增加大脑突触并提高认知能力。
该项研究的高级研究员理查德说：“但愿人脑能和实验动物的大脑一样，对营养食物产生回应，增加大脑突触以储存认知能力。”
在相关的实验中，研究人员将沙鼠分为两组，用鸡蛋中含有的胆碱、甜菜中的尿苷磷酸以及鱼油中的DHA搭配成不同的组合喂食其中一组沙鼠，另一组沙鼠的食物中则完全不含这些营养成分。四周以后对沙鼠进行认知能力的测试，科学家发现，喂食胆碱—尿甘磷酸和胆碱—DHA组合的沙鼠，认知能力有明显提高。科学家解剖沙鼠的大脑，以期获得认知能力提高的生物学原因。他们发现，这些沙鼠大脑突触活动高于正常值，表明它们拥有较高的智商。
《美国实验生物学联合会会志》的总编辑杰拉尔德·魏斯曼说：“我们现在已经知道如何令沙鼠更聪明，那么提高人类智商就不会太遥远。不过坦率的说，也不是很快就会到来。”

㈣ 口袋妖怪红宝石攻略

冒险，从蔓莎拉镇开始了。不论是欧奇多博士的研究所还是竞争对手的家，都座落于这个城镇中。前往至第1线路之后，欧奇多博士就会登场，乖乖的和他去研究所吧！桌子上有三个精灵球（妙蛙种子、杰尼龟和小火龙）去选择一个自己喜欢的PM（本人选择杰尼龟），博士拜托你去常磐市的友谊商店拿回托送物品，刚要离开，竞争对手前来挑战，于是，你的初次对决开始了（战斗过程中系统会有战斗提示，所以初学者不用担心）轻松获胜后，去常磐市友谊商店从店主那里得到托送物品，回来交给博士，就会得到口袋怪兽图鉴了，要离开家乡的时候，千万不要忘记去姐姐家里索取地图（城内地图）那可是冒险必备之物。
通过了1号道路后，再次来到了常磐市，如果此时前往左边的22号道路，就会再次与竞争对手战斗（依据此处战斗的胜负结果，竞争对手所拥有的pm进化形态也会发生变化），在游戏的开始阶段常磐市立体育馆是无法进入的，所以只好向北方进发了（出口处的老爷爷会教你如何进行pm捕捉，初学者好好学习一下吧！）通过了2号道路的常磐之森出入站后就来到了神秘的常磐之森，这里有不少pm训练员，可以和他们进行挑战以获取经验值和金钱,这里的路上可以拣到教程训练机，可以随时提供在线演示，十分方便。森林里生活着各种各样的昆虫系pm，如果这时有飞行系的pm在队伍中，会对战斗十分有利！
走出森林后，来到了日比市，如果认为pm等级够高的话，就去挑战日比市立体育馆的小刚吧，看过动画的人应该知道，他可是训练岩石系pm的高手。打败他以后获得了灰色徽章和39号训练机（岩石封印 100％追加效果让敌人速度下降一个等级）日比市最著名的科学博物馆是向游人开放的，只要花50元就可以进入参观，里边可以看到传说中的口袋妖怪化石镰刀盔和化石翼龙的骨骼标本，二楼还可以看到航天飞机的模型，有一对亲子虽然很想要主角身上的pm，但是因为和所有人很熟识地缘故，所以只好放弃了
离开了日比市，来到了3号道路，这里到月见山洞之间有八位训练员登场，好好利用月见山洞入口附近的pc进行及时的回复吧，在pc大厅左上角会有人出价500元卖秘密pm,其实就是鲤鱼王，玩过红绿蓝的朋友应该不会上他的当了吧。
一切准备就绪以后，就可以进入月见山洞了，里边同样有很多训练员等候主角的挑战，而且，还有身穿黑色衣服的火箭团挡路，经过了重重难关终于到达了山洞的另一端，这时会和考古专家对战，战胜后取得化石的其中一种（左边龟壳化石，右边甲壳化石）不管是做什么用的，先出洞再说（pm快撑不住了啊）
来到空旷的4号道路，途中会遇到两个格斗家，可以向他们学习威力强大的招式，左边的会教授百万吨拳击，右边的会教授百万吨飞踢（好怀旧的招式啊！）一定要记得让你的pm学习，之后来到了著名的水都（守护神?）——花田市，在花田市中，拥有水系pm的馆主小霞（KASUMI~~)早已经做好准备在此等候着主角的到来，将其击败后可以取得蓝色徽章和03号训练机（水波动 有20％可能性追加效果让对手进入混乱状态），在pc左边的屋子里，老人会向你交换蚊香蛙，但是你要有红唇姐（就是冰系＋超能力系的那个人形pm)才可以换得，左上方民居内的老人会给你解释各属性的特点，现在如果没有兑换卷的话，自行车价格简直是天文数字（1000000元）所以不要理会，向北方继续前进。 鴑霌b%[1?
刚到24号道路，竞争对手再度出现，他的pm非常厉害，属性也很全面，要用相克的属性招数来对付，战胜后他会送给主角类似于前作口袋导航仪的装置，主要用于和重要人物、馆主进行联络。在离开了花田市后，来到了黄金球大桥，只要打败桥上的五名挑战者并击败火箭团员（刚开始说话还挺客气，后来狐狸尾巴就露出来了）就可以获得金球最为奖励，进入25号道路后仍然有许多挑战者严阵以待，注意善用恢复道具，继续向前走会看到一个小屋，屋里面只有一只皮皮，和他对话后发现原来是个人，等他进入交换机以后操作下边的电脑就可以帮助他回复原状，为了表达谢意，他会送给你非常重要的SANDOANNU号轮船的船票。再度回到花田市，右边房子门前的警卫会让开，进入后发现屋内一片狼藉，顺着脚印从后边的洞口出去，会遇到火箭团的人（真是无恶不作，让人家怎么住啊？）好好教训他一顿以后，他留下了28号训练机（挖洞 蓄力一回合第二回合攻击，可用于逃出迷宫）逃之夭夭。继续向下方前进，就来到了5号道路，顺着坡道下来可以进入口袋育成屋，可以在这里存放你的pm进行养育，下边的山吹市检查站有检查人员暂时无法通过，所以，只好走右边的地下通道了，入口处的小女孩可以用尼多娜换取尼多兰。
通过了地下通路，来到了6号道路，这个地区有两对男女组合，要小心应付。一直向下就来到了枯叶市，在pc大厅的柜台前有人会送你远程呼叫器，这个东西可以让你反复挑战已经挑战过的训练员，
只要在此人附近使用就可以进行“挑衅”但是，每呼叫一次都要蓄电，所以，还算是有用的东西。在口袋人气俱乐部内，如能忍受会长的长篇大论，就可以从他那里拿到自行车兑换卷（还记得上边提到的天价自行车吗？现在可以免费获得了！）在海边的小屋里和钓鱼人谈话可以获得初级吊杆。由于，枯叶市修行场前边的道路被小树阻挡无法通过，所以，还是先上船再说吧！向水手出示了船票之后就可以进入SANDOANNU号了。
在船舱的客房里又很多游客会与主角对决，所以，回复自然是少不了的，一进门右数第二个房间里，和女孩说话就可以进行回复了。在底层餐厅的垃圾桶里可以找到放树果的袋子，以后可以通个这个道具存储各种果实。来到二层船长室门前和竞争对手进行第四次战斗后，进入船长室和船长说话就可以得到01号秘传机（居合斩 普通攻击技巧，可以破坏小树和草地），刚离开了SANDOANNU号，船就离去了。 cc庆醥噧
让队伍里的pm学习居合斩以后，破坏枯叶市修行场前边的小树后，就可以进入挑战了，馆主是电系pm的使用者马奇士，这里要注意一下，修行场内的机关比较麻烦，建议消除第一个光柱以后存个档，两个光柱全部关闭以后就可以进入挑战了，战胜后可以获得橘色徽章和34号训练机（电击波 必定命中对手）继续向右前进，经过11号道路，来到12号道路入口的2楼，欧基德博士德助手在此等待主角的到来，只要现在捕捉pm数量在30只以上，就可以和他换取探宝机，相信大家对这个仪器都不陌生了，它可以寻找地图上的隐藏物品，上方的男孩会那尼多利换取尼多利娜，刚要准备向12号道路前进，一只硕大的卡比兽就挡在了路的中央，阻止了前进的道路，没办法，只好原路返回。 b~�?]??
来到11号道路，这里会看到地鼠洞穴，从这里可以回到以前经过的2号路，途中的房间找玩gba的男孩可以用凯西换取吸盘魔偶，以前被小树阻挡而无法通过的地方现在也可以通过了，下边的房子里可以拿到05号秘传机（闪光 使对手命中率下降一个等级，可以扩大黑暗中的视野范围）条件是必须要捕捉到10种不同的pm，一定要记得拿啊
下一个目标就是曾经去过的花田市了，途中会经过日比市，科学博物馆右侧的树现在可以破坏了，从这里可以进入到博物馆的后门，和中间的学者说话后，得到秘密的琥珀（请大家记住这个物品，以后要用到的）右下角的工作人员会教授格斗系代表招式地球掷（伤害值和等级相同）几经周折，又回到了花田市，这回有了居合斩的帮助右边的通路也没有问题了（玩这个游戏记忆力不好可不行）把挡路的小树砍掉后来到9号道路，经历了众多训练员的战斗后，来到了岩山隧道旁的pc进行回复，pc中心大厅右边的白衣人会给你不变之石，条件是要捕捉20种不同的pm,回复完毕后进入岩山隧道！
隧道内漆黑一片，只有有限的一点可视范围，幸好之前拿到了05号秘传机闪光（之前没拿到的可别怪冷羽我没提醒过你啊！这一代用完闪光以后的可是范围变为全屏了呢，方便！）洞穴里的结构比月见山洞略显复杂，主要是围绕两层转，训练员以怪兽小子和登山者为主（我的水箭龟专克这类训练家的pm)离开岩山隧道后经过10号道路来到了著名的鬼市——紫苑市。
紫苑市给人一种非常神秘感觉，座落于城市东方的灵骨塔更是云雾缭绕。由于城市并不宽阔，所以，当中也没有设立GYM，这些大概都应该要怪罪于为了慰藉口袋妖怪灵魂而兴建的口袋妖怪灵骨塔了吧？虽然总觉得散发着些许令人害怕的妖气，但是，还是阻止不了我们的调查行动。位于城中的是义工之家，听家里人讲，身为义工之家长老的富士老人，自从灵骨塔之后就行踪不明了，南方的小屋是姓名占卜师家，可以给你的pm更改姓名。为了解救老人，我闯入了灵骨塔，塔内的训练员全部是巫女，使用的是幽灵系pm，建议大家用恶系的招式对付，遇到的敌人都是呈雾状的，所以无法进行实体攻击，只有逃跑。（第五层有一个结界可以进行回复，中央取得灵符）当我即将到达最高层时，在楼梯前遇到一个30级的雾状pm,由于无法进攻也无法前进的缘故，我只好离开了灵骨塔去寻找破低的其他方法……从镇上人那里得知，要让黑雾现身只有去玉虫市取得银色保险丝盒，所以，只有先离开这里了。
从左边出城经过第8号道路，由于通往山吹市的入口有警卫看守，所以暂时从上边的地下通路走吧。（怎么总是地道战啊？）出了通路经过第7号道路来到了最繁华的玉虫市，首先利用居合斩到达玉虫市立体育馆，馆主是喜爱花草的草系pm训练员艾利卡，战胜后获得绿色徽章和19号训练机（强力抽取 命中后将伤害值的一半进行恢复）现在要去百货顶楼购入一些饮料（送礼用）给旁边的小女孩可以得到回报，送她美味之水可以得到16号训练机 精神苏打可以得到20号训练机 综合水果汁可以得到33号训练机。另外，从右边大楼后门进入的话，在顶层的房间桌子上可以拿到依布。关于本市的游戏大厅的游戏介绍，我就不再做文章了（请各位会员期待以后的详解吧！）大厅右边壁画前有个火箭团员形迹可疑，和他说话居然大打出手，将其击败后调查壁画，发现右边出现楼梯，这里应该就是火箭团的地下指挥部了。

【口袋火红全攻略上半部分完成，攻略开始时间21：30 结束时间5：35 此攻略为本人的原创，也是第一次尝试做攻略，所以，语言有错误的地方请您原谅，具体哪里看不懂的也请您指出，我会及时更正，最后，谢谢您对CG和口袋的支持！！】
附带上半部分结束点（火箭团玉虫市基地截图）
口袋妖怪火红版全攻略（下半部分）

火箭团的地下指挥部一共分为四个场景，有两个场景都会出现传送带机关，要先看好传送路径以后在去踩，千万不要太心急，因为这样会更加麻烦的。既然是火箭团的基地，训练员肯定是一水的团员了，轻松的来到B4F,击败左上方房间内的团员以后，他会交给你电梯钥匙，进入电梯（每层的右下方红门）使用电梯要是以后就可以进行楼层选择了，来到B4F，门口有两个团员要一一击败门才会开放，里边坐在沙发上的就是火箭团的魔王——萨克奇，他的pm是大岩蛇 铁甲犀牛和袋熊，击败他以后可以拿到银色透镜（还记得这个东西吗？它就是可以破除灵骨塔内黑雾的关键道具）现在可以顺原路返回紫苑市了。
再度进入神秘的灵骨塔，由于有了银色透镜的帮助，这下就可以看清黑雾的真正身份了，原来是一只30级的格拉格拉（它是无法进行捕捉的）击败它以后进入塔顶，原来富士老人是被火箭团绑架的，连续击败3个团员后解救老人，作为回报富士老人会把自己珍藏的口袋妖怪之笛送给主角，他可以唤醒沉睡的卡比兽，这下又有很多未知地带可以到达了。
由于游戏里一共有两只卡比兽阻挡的道路，所以，下面我将分别写出两条线路的攻略：
线路1：从紫苑市左边通过第8号道路的地下通路来到玉虫市左边的16号道路处唤醒卡比兽（这种罕见的pm一定要捉啊！）通过居合斩砍断小树以后到达左边的民家，和小女孩对话可以得到02号秘传机（飞天 第一回合消失第二回合攻击，可以到达以前去过得城市）快让你的飞行系学习吧，这个可是非常方便的技能！在通过自行车道入口大楼时别忘了和二楼的博士助手对话，如果此时你的pm种类已经到达40种以上时，他会送给你金币护身符（和训练家战斗后金钱获得2倍，就是红蓝宝石版通关后妈妈送的东西啦！）出大楼以后来到自行车专用下坡道17和18号道路，如果之前没有取得自行车的话，是无法进入的。顺利滑行至石竹市入口大楼（左侧），二楼的黄发男孩会用大舌头换取哥达鸭，出大楼进入石竹市。 �
线路2：利用飞天回到枯叶市，通过右边的11号道路入口大楼（如果之前没有得到探宝器的现在可以到二楼取得，不要告诉我现在还没有捕捉到30种pm)出大楼来到12号道路，同样方法击败（捕捉）挡路的卡比兽，第12号道路是垂钓者的聚集之处，水系训练员很多。向北方走又可以回到紫苑市，向南方前进会看见一间小屋和屋内渔夫的儿子说话可以得到中级钓杆，继续向下走会来到13号道路，这里地形较为复杂，由众多栅栏组成，由于下面还要经过训练员区，所以建议做好回复准备以后再向下前进，经过了13 14和15号道路的漫长旅途之后，终于到达了石竹市入口大楼（右侧）二楼同样可以找到博士的助手（分身？）取得学习机（老玩家应该不陌生吧？就是队伍中的pm不战斗一样可以分配到经验值和努力值的好东西）要求是要收集50种不同的pm，出大楼进入石竹市。
进入石竹市后，首先要去石竹市立体育馆和使用毒系pm的馆主强进行对决，体育馆内有很多隐形的墙壁，只要多走走就可以到达馆主所在的位置了，击败强以后可以获得爱心徽章和06号训练机（猛毒 使对手进入中毒状态，毒伤害随回合数增加而提升）找pc左边的屋子里的人，可以让你的pm忘记之前所学的一种招数（对于秘传机招式无法覆盖的，现在可以直接消除了）右边的第二个屋子可以得到高级钓杆，第一个屋子的园长会要你帮助他找丢失在狩猎区的金色假牙。为了可以得到奖励，只有向位于北方狩猎区前进了，
花费300元可以得到30个狩猎球，而且有步数限制（600步），难度也是很大的，在区域3的训练所中可以得到03号秘传机（乘浪 攻击技巧，可以在水上移动）学会以后从下边的水池游过去，就能在草丛中找到金色假牙了，回去交给老人可以得到04号秘传机（怪力 攻击技巧，可以推动怪石)右边刚才不能推动的石头现在可以了，取得神奇糖果（耶～～好几颗了！）
通往山吹市的入口（四个）都有警员把守，从他们的说话态度来分析，这几位警员大概都非常渴，所以先飞回玉虫市，到百货大楼右边的高层建筑第一层找老奶奶要好喝的饮料（千万不要买百货大楼顶层自动贩卖机里的饮料，那三种他们不喝的），把饮料交给其中一个入口的警员之后四个入口都可以通行了，进入山吹市，城内看来已经被火箭团占领了，山吹市立体育馆的门有团员把守暂时无法通过，先去挑战左边的格斗道场吧！击败老师之后，就能够获得格斗系pm代表艾比郎或沙瓦郎。下一个目标就是位于市中心的希鲁佛公司总部，这座大楼一共有11层，内部很多地方由传送点构成，首先在第5层下方拿到钥匙卡，现在可以打开一切封闭的门了，9楼左下有个房间的女孩可以进行pm回复，从3楼中央的传送点可以传送到7楼左上的封闭房间，竞争对手在这里等候着主角的到来，战胜他之后从下边的传送点来到最高层，这里要挑战的是企图侵占希鲁佛公司的萨卡奇，战胜他之后可以从会长那里获得大师球！山吹市再度恢复了平静。体育馆没有了守卫，这下就可以挑战超能力系pm的训练者娜紫美了，体育馆内全部是由传送点构成的，相信有了刚才的经利，这点困难也不算什么了吧，战胜后获得圆月徽章和04号训练机（冥想 自身的特攻特防值上升一个等级）
离开山吹市，用以前学会的乘浪进入市南的19 20号水路，途中登陆孤岛——双子岛，洞内结构非常复杂，冰系pm较多遇敌几率很高，等级不够的还是不要擅自闯入了，到达一出全是岩石的地方，用怪力将其中两块顺着洞推下去，然后跳下，原来了激流也被堵住了，往前游一段，就可以看到三圣兽之一的急冻鸟（lv50）捕捉！出了双子山洞，由于前方水路不通，所以只好用飞天回到主角的家乡蔓莎拉镇了（好怀念啊～～）回家恢复一下后，向南方的21号水路前进，和众多水系训练员一一战斗之后来到了南方的小岛——红莲镇，这里的口袋妖怪研究所可以帮助你复原之前拿到的化石（一个是月见山洞二选一的化石，一个是日比博物馆取得的神秘的琥珀）交给第三个房间的研究人员吧。去调查红莲镇修行场的时候发现门是锁住的，所以只好先去口袋妖怪小屋里一探究竟。在第一层调查一个超梦的石像，启动开关后右边的铁门会交互的开放，在三楼的一个桌子上发现关于口袋妖怪超梦与梦幻的报告，最后到达地下一楼取得桌子上的秘密钥匙和下方的草系太阳光线训练机以后，到红莲镇修行场用钥匙开门后就可以挑战火系pm的使用者卡兹拉了，修行场内又很多关闭的门，要通过启动旁边的机器才可以打开，战胜卡兹拉以后可以得到火焰徽章和38号训练机（大字篝火 有10％的可能性追加烧伤效果）刚出修行场大门，就被人强制送到了陌生的第二块版图1号岛屿。
岛屿上方的山洞内可以泡温泉来恢复pm的体力，找洞内的白胡子老人说话可以得到06号秘传机（碎岩 攻击技巧，有50％的可能性追加效果让敌人的防御力下降一个等级，可以击碎岩石），由于电力问题所以此处的pc都无法存取pm,只有先去位于1号岛屿北部的孤岛一探究竟了，经过了火焰捷径来到了孤岛的山顶，三圣兽之一的火焰鸟（lv50）正在这里等候，捕捉！回到1号岛屿坐水世界号来到2号岛屿，进入一民居得知主人家的小孩去3号岛采集果实至今不知下落所以请求主角的帮助，之后发生电单车党闯入事件，北方小屋里地巫女会教授pm水系代表招式高压水枪。坐船来到3号岛屿，刚一上岛就发现单车党和岛屿居民发生了冲突，上前帮助居民，分别打败三个人之后，头目出现（使用的pm为双弹瓦斯和臭臭泥）击败后敌人撤退（此时电力全部恢复）。继续往岛屿左方探索，进入果实森林，利用居合斩和乘浪来到森林最深处，找到失踪的小女孩，但是发现她根本无法行动，正在奇怪之时，突然从树丛中跳出一直素里普，将其收服以后，小女孩得救，回到1号岛屿的大型pc中心领赏（具体是什么，冷某实在没有看清，请知道的朋友告知）并且送回了红莲镇。
还差最后一枚徽章了，还记得常磐市那个关闭的体育馆吗？现在应该开放了，用飞天直接飞至常磐市，进入常磐市修行场这里的馆主就是之前那个无恶不作的火箭员团长萨卡奇，他使用的pm属于地面和毒系，战胜他以后可以得到羽毛徽章和26号训练机（地震 攻击招式，对手使用挖洞时攻击力加倍）至此，全部的八枚徽章入手，但这并不表示此游戏的终结，更加厉害的对手还在等待着主角的挑战！从常磐市左边的出口进入22号道路，再度遇到竞争对手，他的pm果然有很大的长进，尤其是妙蛙花，顺利的战胜他之后对手离去。 娕^@??G?
最关键的时刻即将到来，我来到了冠军道路，这里设立了八个检查站，只有获得全部徽章的人才可以顺利通过，进入洞穴，这里的训练员果然全部都是超强，一定要注意保存体力和pp值,这里要用怪力把石头推倒白色机关上边才可以消除阻挡的墙壁，在三楼的一处把石头推下洞穴，再跳下来用这块石头压住左边的机关，就可以到达洞口了，出去以后会看到由乱石组成的道路，只能走右边的那条路才可以到达石英高原的主楼，进入大厅后，选取自己最厉害的队伍进入挑战游戏的最终关卡——四大天王和冠军。
四大天王与冠军阵容：
KANSU:lv52 白海豹 lv51 铁甲贝 lv52 胖顿 lv54 红唇姐 lv54 乘龙
SIPA:lv51 大岩蛇 lv53 艾比郎 lv53 沙瓦郎 lv56 豪力 lv54 大岩蛇
菊子:lv53(这个等级没有看清楚）耿鬼 lv54 大嘴蝠 lv56 阿柏怪 lv58 耿鬼 lv53 鬼斯通
WATORU:lv56 暴鲤龙 lv54 哈克龙 lv54 哈克龙 lv60 快龙 lv58 化石翼龙
竞争对手(怎么还来啊？每输够):lv59 比雕 lv63 妙蛙花（根据你所选的主兽） lv59 铁甲犀牛 lv57 胡迪 lv59 暴鲤龙 lv61 风速狗
终于战胜了最后的强敌，博士前来为你的pm做冠军ID登陆，竞争对手生气的跑回家去了，主角成为了新一代的冠军，故事也算是告一段落了～～ 想和大家说的是，其实自己做攻略也蛮有意思的，不信的话你也来试一试啊～～～休息去了

口袋妖怪火红剧情攻略 【完】 冷羽原创，仅供CG参考使用
补充：
花田洞穴进入方法
通关后，如果图鉴种类达到60以上就可以找博士换取386图鉴。然后，用飞天飞到石英高原发现四天王的挑战被暂时取消了，因为冰系天王KANSU离开了，去了桔子群岛。回到枯叶市港口坐船到1号岛屿，到大型pc大厅内找机器前边的工作人员对话，得知红蓝宝石被盗。来到原来捕捉火焰鸟的山会发生火箭团剧情，分别打败两个人之后就可以进入洞穴，再深层得到红宝石，把宝石交给工作人员，这时再去港口的时候会发现4－7号岛屿的航线开通了，来到4号岛有一个口袋育成屋，在这里可以进行pm的培养和生蛋，方法：1、放一公一母给屋里的老人，放的pm只要是同生蛋组别就会生蛋2、过一段时间后会看到外边的那个老人向前走了一步，这时队伍里空一个位置，和他说话得到蛋，如果想让两只pm继续生蛋或升级就不要急于取出3、带着蛋步行，走够一定不熟就会孵化，具体步数由存入的母方种类决定。在4号岛屿的冰洞找到07号秘传机（逆流而上 攻击技巧，移动中可以爬上瀑布）后爬上瀑布会看到冰系天王KANSU，帮助他打败火箭团员后可以继续向6号岛屿前进了，进入6号岛遗迹（门口用居合斩即可进入）后在深层拿到蓝宝石，但是宝石被火箭团的研究人员抢走，于是来到5号岛，发现原来锁着的火箭团基地现在可以进入了，经过传送带来到研究室，打败研究人员以后就可以夺回蓝宝石了，带着这颗宝石来到1号岛屿的pc大厅交给工作人员，就可以启动大型机器了。回到花田市，用乘浪游至左上的洞穴前，发现原来看门的人已经离开，进入洞穴会遇到很多高等级的pm，没有训练员挑战，在最深层可以捕捉lv70超梦

㈤ 武汉博士德生物工程有限公司的翻译是：什么意思

are usually short-lived and are proced in large numbers ringactive fungal growth; and (2) survival spores, which are usually proced insmaller numbers and at a time in the life cycle when the fungus is under somekind of environmental stress.
作为不会移动的异养生物，真菌最终能够发现营养新资源的。这个过程由孢子来完成，即真菌的生殖体。孢子可能是在气生菌丝的中心，将孢子释放到空气中，依赖物种不同，可能是单倍体也可能是二倍体。有两种主要的孢子：（1）分散的孢子，通常生命期短，数量大，主要存在于活跃的菌丝生长阶段；（2）存活孢子，通常产生很少的数量，在生存压力条件下的一种生命循环。

㈥ 如何定位一段寡核苷酸在基因组中的位置

应用寡核苷酸探针检测甘薯基因组中
NB S与 LRR 序列数目
屈满义 , 查向东 ,王钰 ,杨金环 , 蒋琳
()230039 安徽大学生命科学学院 安徽省生态工程不生物技术重点实验室 ,合肥 摘 要 :以含编码 NB S及 LRR 结构域序列的 PCR 扩增产物作标准对照 ,根据 P2LOO P模体及 LRR 结构域氨基酸 序列设计寡核苷酸探针 ,应用 Sou the rn杂交定量检测甘薯基因组中 NB S不 LRR 序列的拷贝数目 。结果表明 ,甘薯 基因组中存在多个拷贝的 NB S不 LRR 编码序列 ,经计算刜步获得了其在基因组中的拷贝数目 ,为揭示甘薯抗病分
子机制及植物抗病分子育种打下基础 。
关键词 :甘薯 ; NB S2LRR;寡核苷酸探针 ; Sou the rn杂交
( ) 文章编号 : 1008 - 9632 200902 - 0011 - 04 中图分类号 : Q94312 文献标识码 : A
寡核苷酸探针是指利用 15～50 bp 核苷酸片段制备的 1 材料与方法
探针 ,因序列长度较小 ,寡核苷酸探针常用于检测小片段 111 植物材料及生化试剂 实验材料选用甘薯高抗茎线[ 1 ] 的 DNA 。应用寡核苷酸探针进行 Sou the rn 杂交 , 避免 虫品种 AB94078 21,由徐
了双链 DNA 探针在杂交中自我复性 ,提高了杂交效率丏 州农科所甘薯研究中心 、安徽省农业科学院提供 。限制性[ 2 ] 检测特异性强 。通过测定基因组 DNA 杂交信号的强 内切酶购自 TaKaR a 公司 ; 琼脂糖购自 OXO ID 公司 ; D ig
度 R andom L abe ling and D e tec tion Kit,并不标准对照的杂交信号相比较 ,可估算出某个特定 购自博士德公司 ; 尼龙 [ 3 ] 基因的拷贝数 。 膜购自 H ybond公司 。
( ) 植物抗病基因 R gene s具有高度的保守性 , 如编码112 甘薯总 DNA 的提叏
( 的蛋白质常具有核苷酸结合位点 N uc leo tide b ind ing site, 甘薯基因组 DNA 提叏采用改进的 CTAB 法 。
) () 113 标准对照甘薯 NB S2LRR 类序列的克隆NB S、富含亮氨酸重复序列 L euc ine2rich rep ea ts, LRR 、
( ) 丝氨酸 2苏氨酸激酶 Se rine 2th reon ine k ina se, STK等结构 11311 引物设计及 PCR 扩增
根据 H e 等克隆的甘薯 NB S2LRR 类抗病基因同源序 域 。NB S及 LRR 类抗病基因是 R 基因中最大的类群 ,其
() ( ) 蛋白产物含一个核苷酸结合位点 NB S和一个富含亮氨 列 GenB ank 登录号 : DQ903640 的 P2LOO P 和 GL PLA 区 [ 4 ] () 酸重复 LRR 结构域 。有关 NB S2LRR 类序列拷贝数的 序列设计上游引物 P21: GGTGGGGTTGGGAA GACA ,下游
分析 ,目前主要集中在已获得基因组全序列的植物 ,例如引物 P22: CCACGCTA GTGGCAA TCCTT。以甘薯高抗茎线 [ 5 ] 虫病品种 Zhou等 収现水稻 NB S2LRR 类序列占整个基因组的 1%AB9407821 基因组 DNA 为模板 , 利用上述引物 [ 6 ] ～2% ,而拟南芥基因组中有 149 条 NB S2LRR 类序列 。 进行 PCR 扩增 ,反应体积为 20uL ,其中包含 1 ×PCR B uff2
甘薯为同源多倍体 ,基因组较大 ,其基因组全序列尚未获 e r, 2mmo l /L M gC l, dN TP10m mo l /L , 上 、下 游 引 物 各2
μ 3mo l /L ,模板 DNA30 ～50 ng, 115U Taq 酶 ,反应在 Epp en2得 ,复杂的遗传背景为在分子水平研究甘薯抗病机制带来 [ 7 ] do rf 5331 型 PCR 仪上进行 。扩增程序为 : 94? 2m in, 1 个 了一定的困难 。本研究应用寡核苷酸探针对甘薯高抗
茎线虫病品种 AB94078 21 基 因 组 DNA 进 行 Sou the rn 杂 循环 ; 94 ? 40 s, 55 ? 50 s, 72 ? 90 s, 30 个循环 ; 72? 5m in;
4?保存 。交 ,检测基因组中 NB S及 LRR

㈦ 博士德配件与维修管理系统怎样备份和恢复数据

打开服务器端程序 里面有数据备份选项。备份后复制到新的电脑上安装同样版本的数据库 恢复数据就可以了。 844256300

㈧ 武汉博士德生物工程有限公司怎么样

简介：武汉博士德生物工程有限公司成立于1993年，坐落于武汉关山二路特一号国际企业中心，是一家致力于抗体、免疫检测系统和ELISA试剂盒等研发和生产的综合性现代化高科技企业。
法定代表人：夏一方
成立时间：1996-11-19
注册资本：500万人民币
工商注册号：420100000032153
企业类型：有限责任公司(自然人投资或控股)
公司地址：东湖开发区关山二路特一号国际企业中心3－502号

㈨ 选专业，我想探求生命前沿，请问生命科学属于哪个专业

只做补充：

生物方面专业四个方向： 生物科学 生物技术 生物工程 生态学

11日，教育部阳光高考网站公布了2010年中国大学“红黄绿牌”专业名单。“红牌”专业主要是指失业量较大，就业率持续走低，且薪资较低的专业中综合考虑的前几个专业，属于高失业风险型专业。

被亮“红牌”的本科专业(10个)：动画、法学、生物技术、生物科学与工程、数学与应用数学、体育教育、生物工程、计算机科学与技术、英语、国际经济与贸易。

生科，生工，生技都榜上有名。很不幸呀！！！