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免疫组织化学法

发布时间: 2021-08-01 05:28:13

⑴ 免疫组化这种方法怎么样,和CST中国董增军有什么关系

免疫组化作为常规病理检测手段,是很多疾病检测的“金标准”,不仅能够辅助指导疾病分型,作为靶向用药的依据;而且因其能还原组织形态、找准靶点细胞亚定位信息,在临床前研究中也发挥着不可替代的作用。CST中国董增军是美国CST公司亚太区总裁兼中国公司总经理,他提倡使用免疫组化。

⑵ 免疫组织化学染色诊断是什么意思

指在抗体上结合萤光或可呈色的化学物质,利用免疫学原理中抗原和抗体间专一性的结合反应,检测细胞或组织中是否有目标抗原的存在,此方式不只可以用来测知抗原的表现量也可观察抗原所表现的位置。只要是能够让抗体结合的物质,也就是具有抗原性的物质包括蛋白质、核酸、多糖、病原体等都可侦测。

免疫组织化学的优势在于专一性、灵敏度、简便快速以及成本低廉,所以广为医院采用,通常是借由特定的肿瘤标记来筛选癌症。免疫组织化学染色法对基础研究及预防和诊疗上都是相当重要的一个方法。

(2)免疫组织化学法扩展阅读

应用的基本原则简述如下:

1、确定细胞类型和形态。组织细胞内有些蛋白具有组织特异性,如胶质原纤维酸性蛋白只存在于星形胶质细胞内,神经丝蛋白只存在于神经细胞内。通常把这些具有组织特异性的蛋白称为标记性蛋白。通过标记性蛋白的特异性抗体可确定细胞种类。

有些细胞在光镜下不易辨认,通过对胞质内的特定蛋白实施免疫组化染色,便能清楚显示此类细胞外形轮廓。这种作用在神经科学研究和肿瘤临床病理中显得尤为重要。

2、辨认细胞产物的来源。利用某些细胞产物为抗原,制备相应的抗体,对组织细胞实施免疫组织化学染色,以确定细胞产物的来源。如内分泌细胞产生的各种激素,大多数可用免疫组化染色技术辨认,据此可研究细胞的分泌功能及对内分泌肿瘤作功能分类,检测分泌异位激素的肿瘤等,了解细胞分化程度。

3、确定细胞的分化程度。不同的同一类细胞多表达不同的标志性蛋白,根据对这些不同蛋白的鉴定可确定细胞的分化程度。例如,神经上皮细胞的标志性蛋白是巢蛋白,当其分化为放射状胶质细胞时表达波形蛋白。

在神经元发生期分化为成神经细胞时则表达Ⅲβ神经微管蛋白,成神经细胞分化为成熟的神经元时表达神经丝蛋白。

4、追踪神经纤维束和它的投射区。用于此目的的免疫组织化学方法常与轴浆运输示踪法相结合来研究神经元之间的联系,轴浆运输示踪法是利用某些物质可被神经末梢摄取,经轴质逆行运输到胞体的特点,用组织化学方法显示出神经元的轮廓。常用示踪剂有辣根过氧化物酶和荧光金等。

5.在临床病理中的应用。如鉴定病变性质,发现微小病灶,探讨肿瘤起源或分化表型,确定肿瘤分期,指导治疗和预后。辅助疾病诊断和分类,寻找感染病因等。

⑶ 免疫组化结果有几种分析方法

有阳性细胞区域直接测试方法。

免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。
这些常用免疫组织化学方法的原理如下:
1. 免疫荧光细胞化学技术
将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量.
2. 免疫酶细胞化学技术
是目前免疫组织化学研究中最常用的技术.基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究.
3. 免疫胶体金技术
就是用胶体金标记一抗,二抗或其他的能特异性的结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针对组织或细胞内的抗原进行定性,定位或定量研究.由于胶体金的电子密度高,多用于免疫电镜的单标记或多标记的定位研究.

⑷ 免疫组织化学sp法和pv法的区别

一·第二代聚合酶两步法( PV,En Vision) PV-9000是2001年投入美国市场的,它是将二抗抗体分子的单价Fab段与酶聚合在一起,与一抗结合后,直接用底物进行显色的方法。此方法由于简单、快速、敏感性强且避免了内源性生物素所造成的背景染色,以有逐渐取代其他免疫酶组织化学检测方法的趋势。 PV法操作流程 1石蜡切片脱蜡至PBS。 2 0.3%H2O2甲醇液或3%H2O2室温孵育20min。 3 抗原修复。 4滴加适当稀释的一抗370C 60min或40C过夜。 5 PBS洗涤。 6 酶标记二抗370C 30min或室温60min。 7 DAB(0.04%)显色(镜检控制),水洗、复染、封片 二·sp法是一抗+生物素化二抗+HRP标记的链霉卵白素(HRP标记的亲和素) 一般的sp法步骤啊,具体如下: 1.烤片,68℃,20分钟, 2. 常规二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水;二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min 3.阻断 灭活内源性过氧化物酶:3%H2O2 37℃孵育10min,PBS冲洗3X5min; 4. 抗原修复:置0.01M枸橼酸缓冲液(PH 6.0)中用煮沸(95℃,15-20min),自然冷却20min 以上,再用冷水冲洗缸子,加快冷却至室温,PBS冲洗3X5min。 5. 正常羊血清工作液封闭,37℃10 min,倾去勿洗. 6. 滴加一抗4℃ 冰箱孵育过夜,PBS冲洗3X5min(用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照); 滴加生物素标记二抗, 37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min; 7. 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液,37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min; 8. DAB/ H2O2反应染色,自来水充分冲洗后, 苏木素复染,常规脱水,透明,干燥,封片。 三·检测试剂盒 灵敏度高而极易控制背景的检测系统试剂盒是最为理想也是免疫组化染色优劣的关键,根据免疫组化技术发展至今PV系列及SP试剂盒更优于其它试剂盒。检测系统应与一抗来源相匹配,否则检不出目的物。如一抗是鼠单或多抗的,二抗就应该是羊或兔抗鼠的。 四·建议选SP,亦可根据实验室习惯及在组织中的表达情况来定

⑸ 常用免疫组织化学染色方法有哪些

常用免疫组织化学染色方法, LSAB法。(SP法)(Labelled streptavidim biotln) 1.切片脱蜡至水。 2.0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟。 3.水洗。 4.抗原修复。 5.PBS洗3次,1分钟/次。 6.加入血清孵育10分钟。 7.摔去血清,加入一抗孵育30-60分钟。 8.PBS洗3次,每次2分钟。加入二抗,孵育20分钟。 9.PBS洗3次,每次2分钟。 10.加入SP复合物孵育20-30分钟。 11.PBS洗3次,每次2分钟。 12.DAB-H2O2孵育5-10分钟。 13.PBS洗,水洗。 14.Harris苏木素染核5-10分钟。 15.水洗,分化 ,蓝化,脱水,透明并封固。生物帮上面有的,去看看吧, http://www.bio1000.com/zt/disease/ 疾病机理,疾病研究。

⑹ elisa是免疫组织化学技术吗

免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
elisa(酶联免疫吸附试验)
用到了免疫学原理和化学反应显色,待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液,因而没有用到组织包埋、切片等技术,这是与免疫组化的主要区别,操作上 开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面,从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上,这就是“吸附”的含义。
免疫组化和elisa所用到的原理 大致相同,只是因为所检测的样品不同,从而在操作方法上有所不同。Elisa多用于定量分析,其灵敏度非常高。

⑺ 免疫组织化学技术和酶联免疫法的区别

免疫酶技术是将酶标记的抗原或抗体分子形成的酶标抗体或酶标抗原,称为酶结合物,在抗原与抗体形成复合物后,该酶结合物作用于加入底物使之显色,根据颜色的深浅来定位抗原与抗体。
ELISA试验是免疫酶技术的一种,既是利用聚苯乙烯微量板吸附抗原或抗体使之固相化,每次反应都要反复洗涤,免疫反应和酶促反应都要在其中进行,这既保证了反应的定量关系,也避免了未反应的游离抗体或抗原的分离步骤。
法IH
是用已知的特异性抗体与标本中待测抗原反应,如待测抗原是特异性抗体的相应抗原形成抗原抗体复合物仍然保持其抗原活性,可以与相应的第二抗体酶物结合,遇酶底物产生颜色反应。根据颜色反应判定结果。

⑻ 免疫组织化学染色是什么意思

免疫组织化学染色法是指在抗体上结合萤光或可呈色的化学物质,利用免疫学原理中抗原和抗体间专一性的结合反应,检测细胞或组织中是否有目标抗原的存在,此方式不只可以用来测知抗原的表现量也可观察抗原所表现的位置。只要是能够让抗体结合的物质,也就是具有抗原性的物质包括蛋白质、核酸、多糖、病原体等都可侦测。

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