化学发光分析

『壹』 化学发光分析法的简介

化学发光与其它发光分析的本质区别是体系产生发光 ( 光辐射 ) 所吸收的能量来源不同。体系产生化学发光，必须具有一个产生可检信号的光辐射反应和一个可一次提供导致发光现象足够能量的单独反应步骤的化学反应。
化学发光Western 杂交检测，是同位素检测的一种高度灵敏的替代方法。酶标记抗体取代了放射性标记抗体， 当它作用于底物时，可产生光信号。多数特异抗原检测方法以辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP) 二级抗体 耦联物为基础。信号可通过感光胶片或专用的成像设备来采集。化学发光底物用于免疫印迹技术已有十几年的历史，大部分实验室做转印时都会采用化学发光技术进行检测。随着冷CCD化学发光检测技术的发展，越来越多的实验室都开始采用冷CCD的凝胶成像系统进行化学发光的检测，胶片成像虽然比自然发光法灵敏度更高，但也有很多缺点：耗时，需要暗房，显影剂和胶片，胶片较贵且为需持续购买的消耗品。同时由于胶片的线性范围较窄，因此用胶片上的条带（特别是表达量较低的条带）进行定量几乎不可能。冷CCD技术与X胶片相比具有瞬时影像处理、高灵敏度和高分辨率、动力范围广等优点，因此能对条带进行精确定量。当然这项技术要求底物能产生高强度长持续时间的信号，以保证信号能被冷CCD的凝胶成像系统捕获。在这方面多家公司都提供了相应的化学发光底物或试剂盒，特别是Bio-Rad Immun-Star™ AP 化学发光试剂盒 、bio-rad Western-C化学发光检测试剂盒等。Western-C化学发光检测试剂盒底物可产生高强度的持续光信号24小时，因此用户可以进行多次曝光，最低可检测至10-19mol，配合Bio-Rad屡获大奖的化学发光成像系统ChemiDoc XRS或VersaDoc系统能得到得到高质量的印记信号 。

『贰』 化学发光分析的介绍

简介利用化学发光进行化学分析的方法。化学反应能产生某种处于电子激发态的产物，当这种产物分子发生辐射跃迁或将能量转移给其他会发光的分子使该分子再发生辐射跃迁时，便产生发光现象。这种由于吸收了化学能，使分子产生电子激发而发光的现象称为化学发光。

『叁』 化学发光分析的进展

化学发光分析由于不使用光源，可避免杂散光的影响,但操作要控制得比较严格,方能得到准确、再现性好的结果。近几年来，由于发光检测技术的改善和电脑技术的飞跃发展，进样和试剂混合全由微处理机控制以及反应系统全部自动化的化学发光分析仪器的问世，大大提高了分析的速度、灵敏度和准确度。新化学发光试剂的研制，以及化学发光分析和色谱分离技术（见色谱法）的联用，又进一步扩大了本法的应用范围。

『肆』 化学发光分析法的化学发光分析系统介绍

在整个的检测系统中其关键的部分为 PMT ，其直接影响到仪器的检测性能，其最高检测极限为 10 － 22 mol/L 。不同型号的仪器其检测技术不一样，但基本原理都是利用待测组份与体系的化学发光强度呈线性定量关系，而化学发光强度随体系反应进行的速度增强或衰弱。记录仪记录峰形，以峰高定量，也可以峰面积定量。因化学发光多为闪烁式发光 (1—2s 左右 ) ，故进样与记录时差短，分析速度快 。

『伍』 化学发光免疫分析原理是什么

化学发光免疫分析包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化，形成一个激发态的中间体，当这种激发态中间体回到稳定的基态时，同时发射出光子(hM)，利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体)直接标记在抗原(化学发光免疫分析)或抗体(免疫化学发光分析)上，或酶作用于发光底物。
化学发光免疫分析根据其所采用的标记物的不同可分为发光物标记、酶标记和元素标记化学发光免疫分析三大类。发光物标记的CLIA是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物(如吖啶酯)，在反应体系中发光物质在碱性介质中氧化时释放大量自由能，产生激发态的中问体，该激发态的中间体由最低振动能级回到稳定的基态，各个振动能级产生辐射时，同时产生能量，多余的能量即为发射光子，从而产生发光现象。利用发光信号的测量仪器，分析接收的光量子产额，通过计算机系统转换成被测物质的浓度单位。在此系统中包含两个部分，化学发光反应系统和免疫反应系统，即在抗原一抗体特异性反应过程中，伴随有化学反应过程而产生光的发射现象。化学反应系统中以化学反应为基础，化学发光的首要条件是吸收了化学能而处于激发态的分子或原子必须能释放出光子或者能将能量转移到另一个物质的分子上并使这种分子激发，当这种分子回到基态时释放出光子。
化学发光与荧光的根本区别是形成激发态分子的激发能原理不同。荧光是发光物质吸收了激发光后使分子产生发射光；化学发光是化学反应过程中所产生的化学能使分子激发产生的发射光。因此，化学发光反应过程必须产生足够的激发能是产生发光效应的重要条件。化学发光反应可在气相、液相或固相反应体系中发生，以液相发光在免疫学检测中最常应用。

『陆』 化学发光与其它发光分析有什么区别

化学发光与其它发光分析的本质区别是体系产生发光 ( 光辐射 ) 所吸收的能量来源不专同。体系产生化学发属光，必须具有一个产生可检信号的光辐射反应和一个可一次提供导致发光现象足够能量的单独反应步骤的化学反应。

『柒』 什么是化学发光分析方法

化学发光分析测定的物质可以分为三类：第一类物质是化学发光反应中的反应物；第二类物质是化学发光反应中的催化剂、增敏剂或抑制剂；第三类物质是偶合反应中的反应物、催化剂、增敏剂等。这三类物质还可以通过标记方式用来测定其他物质，进一步扩大化学发光分析的应用范围。

化学发光反应的发光类型通常分为闪光型（flash type）和辉光型（glow type）两种。闪光型发光时间很短，只有零点几秒到几秒。辉光型又称持续型，发光时间从几分钟到几十分钟，或几小时至更久

『捌』 化学发光分析的应用

化学发光分析的灵敏度高，是痕量分析的重要手段之一，在环境监测、临床分内析、生物化容学等领域里，例如污染物测定、酶分析、免疫测定法和痕量金属分析等方面得到广泛的应用。例如，致癌物亚硝胺经热解后产生亚硝酰自由基NO·，后者与臭氧反应，产生激发态二氧化氮NO壗，最后成为二氧化氮而发光,可用于亚硝胺的检测,灵敏度达亚ppb级。鲁米诺在某些氧化剂存在下的发光反应，可用于测定这些氧化剂；苯巴比妥与过氧化氢的反应为某些过渡金属及其他一些物质所催化，可用来测定这些起催化作用的物质。又如，用化学发光分析可测定腺嘌呤核苷三磷酸酯(ATP),检出限为10～10摩尔；许多酶催化的过程以 ATP作为反应物或产物，借测量ATP可测定酶的活性。