武漢博士德生物

A. 沙鼠的科學實驗

【摘要】目的 研究沙鼠短暫性腦缺血及西比靈干預後腦內Smad2和Smad4蛋白的表達。方法 製作沙鼠腦缺血再灌注模型，用免疫組化法檢測腦內Smad2、Smad4蛋白的表達變化。結果 各組沙鼠神經元和膠質細胞胞漿內均有Smad2、Smad4蛋白陽性表達，且Smad4蛋白表達均顯著強於Smad2蛋白。缺血再灌注6h、1天後Smad2、Smad4蛋白表達顯著上調(P<0.05)。同腦缺血組相比，西比靈干預組20隻沙鼠神經元和神經膠質細胞內Smad2和Smad4蛋白在缺血再灌注6h、1天時表達明顯下調(P<0.05)。結論 沙鼠腦神經細胞和神經膠質細胞內均有Smad2、Smad4蛋白表達；西比靈干預後，缺血再灌注沙鼠腦神經細胞和神經膠質細胞內Smad2和Smad4蛋白表達下調。提示Smad2和Smad4蛋白可能是缺血性腦損傷程度的又一重要標志；Smad4、Smad2在沙鼠腦缺血的發生和發展過程中可能有協同作用。
【關鍵詞】Smad蛋白；免疫組化；缺血再灌注；沙鼠
體內外實驗均證明，轉化生長因子β有神經保護作用。腦缺血後，腦組織內TGF-β表達增高，是機體對缺血性腦損傷的一種保護性反應。TGF-β1增高能減少腦梗死面積，抵禦腦缺血性損傷。Smad蛋白是輔助TGF-β超家族信號在細胞內傳導的一族蛋白，包括了Smad2、Smad4等；直接參與TGF-β超家族成員的信號傳導，是TGF-β超家族成員參與生命活動的重要介質。我們通過免疫組化技術測定沙鼠正常腦組織；缺血再灌注後腦組織及西比靈干預後缺血再灌注後腦組織及Smad2/4轉錄水平的表達,初步發現了Smad2、Smad4之間的關系，現報告如下。
材料方法
1.1 實驗材料
1.1.1 實驗動物 健康雄性蒙古沙鼠60隻，9月齡，體重（90±5）g，購自上海實驗動物管理委員會。隨機分為正常組、假手術組、腦缺血組及西比靈干預組。
1.1.2 主要試劑 Smad2、Smad4免疫組化檢測試劑盒，一抗(鼠IgG)，二抗(羊抗鼠IgG)，抗原修復液I，山羊血清封閉液、SABC等和DAB顯色試劑盒均由武漢博士德生物工程有限公司提供；西比靈膠囊由西安楊森醫葯公司提供。
1.1.3 主要儀器 石蠟切片機、免疫組化專用蓋玻片(武漢博士德生物工程有限公司提供)、恆溫箱、冰箱、顯微鏡、照相機等。
1.2 實驗步驟和方法
1.2.1 動物模型的建立 健康雄性蒙古沙鼠，用3%戊巴比妥以30mg/kg的劑量腹腔注射進行麻醉，固定動物，消毒，頸正中切開皮膚1.5cm左右，鈍性分離皮下組織，分離雙側頸總動脈，微血管夾夾閉雙側頸總動脈10min後松夾再灌注，縫合皮膚。
1.2.2 動物的分組和處置 正常組10隻，不予任何處理即斷頭處死動物。假手術組10隻，僅分離雙側的頸總動脈，不予夾閉，就縫合皮膚，1天後斷頭處死。腦缺血組：共20隻沙鼠，分為缺血6h組（IR6h）、缺血1天組（IRld）兩組，每組10隻，分別在缺血再灌注(IR)6h、1天時間點處死動物。西比靈干預組共20隻沙鼠，分為IR6h,IRld兩組，每組n=10，在缺血再灌注前一天給予餵食西比靈[按20mg/(kg·d)]。分別在缺血再灌注(IR)6h、1天時間點處死動物。所有實驗動物在預定時間斷頭處死，快速取前腦置10%福爾馬林固定,常規石蠟包埋後5μm連續切片。
1.2.3 結果判定 病理結果採用相鄰腦組織切片作常規HE染色，用光鏡觀察其組織病理變化，估計腦損傷程度。免疫組化取各組沙鼠斷面水平相似的連續組織切片，所有切片分析均在同一強度、同一放大倍數下進行，每個指標採用陽性細胞計數法。在40×10倍的光鏡視野下觀察免疫反應，以細胞漿著棕褐色為陽性，每張切片在高倍視野下分別取上、下、左、右及中心共5個區域進行細胞計數, 每個區計數200個細胞, 共計數1000個細胞, 計算染色細胞所佔比例，即為Smad2、Smad4表達指數。
1.3 統計學分析 各組檢測結果用單因素方差分析方法，2個獨立樣本用t檢驗，兩變數間相關關系用直線相關分析，計算Pearson相關系數;確定P<0.05差異有顯著性；所有統計分析均用SPSS11.0統計軟體包完成。
結果
2.1 病理觀察結果 正常組和假手術組皮層組織形態結構正常。腦缺血組IR6h可見部分神經元和膠質細胞輕度水腫；IRld後神經元出現變性、灶性壞死、膠質細胞輕度增生。西比靈治療組:IR6h、IRId各組分別同腦缺血組相應時間點相比，腦組織損傷程度均明顯輕於腦缺血組。
2.2 免疫組化結果 所有正常沙鼠腦組織神經元和神經膠質細胞內均有Smad2和Smad4蛋白不同程度的陽性表達，多呈棕黃色顆粒;顆粒主要定位於胞漿，部分定位於胞核。但表達程度有所不同，Smad4蛋白表達強於Smad2蛋白，統計差異有顯著性(P<0.05)。在缺血再灌注沙鼠腦組織中，神經元和神經膠質細胞內也有不同程度的Smad2和Smad4蛋白的陽性表達，表達部位與正常組基本一致，Smad4蛋白表達也高於Smad2蛋白，統計差異有顯著性(P<0.05)。缺血再灌注組（IR6h、IR1D）與正常組、假手術組比較，Smad2和Smad4蛋白陽性表達率增高，統計差異有顯著性(P<0.05)。西比靈干預組Smad2和Smad4蛋白陽性表達率低於同時間點的腦缺血組，高於同時間點的正常對照組，統計差異均有顯著性(P<0.05)（圖1、2；表1）。表1 各組Smad2和Smad4蛋白表達指數比較 註：與正常對照組比較，▲P<0.05；與同時間點缺血組比較，△P<0.05；與各組Smad4蛋白比較，*P<0.05
討論
Smad蛋白質群是發現的新的細胞內信號傳導蛋白，它們直接參與TGF-β超家族成員的信號傳導。已發現的Smad蛋白至少有10種，在哺乳動物中有8種，Smad1～Smad8。其中，參與調節TGF-β的Smads包括Smad1,2,3和4。Smad2由Eppert等於1996年從人腎cDNA文庫中克隆獲得，其C端含有SSXS結構，SSXS結構能被特異的絲氨酸激酶I型受體磷酸化，進而參與信號傳導。Smad4C端不含SSXS結構，它不能特異地介導信號傳導，但它能與Smad1,2,3,5和8等結合後協同激活各自的特異靶基因，因此也稱為協同Smad；當TGF-β受體活化後，可以誘導限制途徑Smad2和Smad3通過細胞膜特異的絲氨酸/蘇氨酸激酶受體活化而發生磷酸化，再與共有型Smad4結合成寡聚體轉運到細胞核，在細胞核直接地應答TGF-β的轉錄功能，這一結構是TGF-β細胞內信號的開關。
國內外已有研究Smad2和Smad4蛋白在心肌細胞、肝細胞、牙乳頭細胞和胃癌等細胞和組織中有表達，但沙鼠腦組織中是否存在Smad2和Smad4蛋白表達尚未見文獻報道。本實驗用免疫組化方法檢測到正常沙鼠腦組織神經細胞和神經膠質細胞胞漿和胞核內均有Smad2和Smad4蛋白表達，Smad4蛋白表達強於Smad2蛋白，兩者差異有顯著性。這表明Smad2和Smad4蛋白作為TGF-β在細胞內信號轉導的分子，在於沙鼠神經細胞及神經膠質細胞中是必需的，神經細胞及神經膠質細胞需要Smad2和Smad4蛋白的表達才能發揮正常功能。而Smad4蛋白表達高於Smad2蛋白的可能原因是Smad4蛋白是TGFβ信號通路的共同通路有關。Smad2和Smad4蛋白在缺血再灌注6h，1天時沙鼠神經細胞、神經膠質細胞胞漿和胞核內也均有表達，且較正常沙鼠神經細胞、神經膠質細胞胞漿和胞核內的表達有明顯上調，兩者差異有顯著性。進一步分析發現Smad2和Smad4蛋白在缺血第1天時間點表達比在缺血第6h時間點表達更明顯(P<0.05)。腦缺血再灌注後Smad2和Smad4蛋白表達升高的可能原因我們認為是：腦缺血再灌注後，腦組織發生損害，氧自由基等有害物質表達增加，機體為了抵禦這些有害因子，反應性地上調一些保護性因子，這其中就有TGF-β1。Smad2和Smad4蛋白是TGF-β1信號轉導的必需分子，故當TGF-β1表達上調時，可能需要更多Smad2和Smad4蛋白來轉導具有腦保護作用的TGF-β1的信號，而1天時TGF-β1表達較6h更高，Smad2和Smad4表達也相應增多。統計還發現，正常對照組、缺血組沙鼠腦神經細胞和神經膠質細胞內Smad4蛋白和Smad2蛋白表達存在正相關關系，其Pearson相關系數為0.582，這提示Smad4蛋白和Smad2蛋白在正常沙鼠腦組織內及腦缺血的發生和發展過程中可能有協同作用，這與大多數研究一致。西比靈是經典的鈣離子拮抗劑，它有明顯的腦保護作用。西比靈可有效的抑制神經細胞膜受體依賴性Ca2+通道開放，具有神經保護作用，並具有減輕皮質抑制，縮短恢復時間，防止腦組織缺血性改變的功能，增加腦組織對缺氧的耐受性。已有研究表明，西比靈發揮腦保護是通過以下機制實現的:西比靈可增加腦組織對缺氧的耐受性，有神經細胞保護作用；抑制病理性血管收縮，阻止血小板聚集，抗自由基作用，拮抗興奮性氨基酸作用；改善腦循環，減輕腦水腫；避免再灌注性損傷[6]。由於Smad是TGF-β信號轉導通路必需的，故闡明正常、缺血沙鼠腦組織內Smad4和Smad2蛋白的表達水平有助於加深對TGF-β胞內信號轉導機制的理解，也有助於深入闡明腦缺血缺氧的發病機制，為其進一步深入分子水平的研究與治療打下基礎。
使其聰明
《美國實驗生物學聯合會會志》發布一項新的研究成果稱：「有證據表明，如果我們能夠聰明的吃，我們就會變得更聰明」。麻省理工大學的科學家指出，從嬰兒配方奶粉到雞蛋等日常飲食中吸取的營養成分，能夠增加大腦突觸並提高認知能力。
該項研究的高級研究員理查德說：「但願人腦能和實驗動物的大腦一樣，對營養食物產生回應，增加大腦突觸以儲存認知能力。」
在相關的實驗中，研究人員將沙鼠分為兩組，用雞蛋中含有的膽鹼、甜菜中的尿苷磷酸以及魚油中的DHA搭配成不同的組合餵食其中一組沙鼠，另一組沙鼠的食物中則完全不含這些營養成分。四周以後對沙鼠進行認知能力的測試，科學家發現，餵食膽鹼—尿甘磷酸和膽鹼—DHA組合的沙鼠，認知能力有明顯提高。科學家解剖沙鼠的大腦，以期獲得認知能力提高的生物學原因。他們發現，這些沙鼠大腦突觸活動高於正常值，表明它們擁有較高的智商。
《美國實驗生物學聯合會會志》的總編輯傑拉爾德·魏斯曼說：「我們現在已經知道如何令沙鼠更聰明，那麼提高人類智商就不會太遙遠。不過坦率的說，也不是很快就會到來。」

B. 武漢博士德生物工程有限公司怎麼樣

簡介：武漢博士德生物工程有限公司成立於1993年，坐落於武漢關山二路特一號國際企業中心，是一家致力於抗體、免疫檢測系統和ELISA試劑盒等研發和生產的綜合性現代化高科技企業。
法定代表人：夏一方
成立時間：1996-11-19
注冊資本：500萬人民幣
工商注冊號：420100000032153
企業類型：有限責任公司(自然人投資或控股)
公司地址：東湖開發區關山二路特一號國際企業中心3－502號

C. 武漢博士德生物工程有限公司的翻譯是：什麼意思

are usually short-lived and are proced in large numbers ringactive fungal growth; and (2) survival spores, which are usually proced insmaller numbers and at a time in the life cycle when the fungus is under somekind of environmental stress.
作為不會移動的異養生物，真菌最終能夠發現營養新資源的。這個過程由孢子來完成，即真菌的生殖體。孢子可能是在氣生菌絲的中心，將孢子釋放到空氣中，依賴物種不同，可能是單倍體也可能是二倍體。有兩種主要的孢子：（1）分散的孢子，通常生命期短，數量大，主要存在於活躍的菌絲生長階段；（2）存活孢子，通常產生很少的數量，在生存壓力條件下的一種生命循環。

D. 抗體的實質是什麼

抗體的本質：球蛋白,是一種分泌蛋白,存在於體液中細胞器：核糖體（多肽鏈的合成）、內質網和高爾基體（蛋白質的修飾與加工）、線粒體（分泌蛋白通過胞吐方式離開細胞,進入體液,需要能量）。